[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
랩박스 - 형광 이미징의 모든 것
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 1510  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 western blot 관련하여 질문드립니다!
알zz94(과기인)  |  02.18 10:37
첨부파일 파일첨부: 1..jpg (249 KB)
이미지 첨부파일

western blot결과가 계속 안나와 도움요청드립니다.ㅠㅠ

1. membrane 0.2 pvdf - 사용전 methanol 담궜다 사용

2. gel - bio-rad 12% 사용

3. Buffer (loading, transfer) 구매해서 사용

4. gel loading : 80v 10min후 100v 30-40min

이 조건으로 하고있습니다. (cell extraction_RIPA Buffer+PI+PMSF)

문제는 트랜스퍼 후 저렇게 폰슈염색을 해보면 노란색 범위의 사이즈들이 확인이 안됩니다. gel을 염색해봐도 저 사이즈들에서 밴드가 확인이 안되요.

트랜스퍼 과정에서 문제가 있었나 하여,

30V, overnight 콜드룸 / 100V 1 h, ice / 100V 30 min, ice 로

확인해봤는데 다 결과가 저렇게 나오더라구요

gel 구매한 datasheet에도 transfer 조건은 100v 30min-1h으로 나와있습니다. 같은 membrane에서 노란색범위부분을 제외한 윗부분에선 ampk를 확인했을 땐 anti-body까지 붙혀서 밴드 확인이 가능하구요.

GAPDH, IL-6가 저 범위에 해당하는데 시그널 강한 GAPDH조차 확인이 안됩니다ㅠㅠ  팀장님은 잘모르셔서 문제점에서 계속 벗어난 이야기만 해서 디스커션도 불가능하고 너무 답답하고 스트레스받고... 답변 부탁드려요!

 

#웨스턴
 
#안티바디
 
#트렌스퍼
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  02.18 10:45  

sample을 어떤 방법으로 준비했나요?

marker lane에도 지저분하게 보입니다.

우선 gel을 염색해서 SDS-PAGE가 정상적으로 되는지 확인할 필요가 있을 것

같습니다.

 

알zz94  |  02.18 10:51  

upload_image

추가로 다른 사진도 첨부합니다.

RIPA Buffer+PI+PMSF 사용하구요, PBS워싱 후 60mm dish 기준 혼합한 buffer 100 ul씩 처리하여 모아준뒤 ice에서 10분 정도 방치하고 4도 센트리 이용하여 harvest 합니다. 

답변하기
할인행사 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Spark cyto 하나의 장비로 한 번에!! Multi-mode microplate rea.. (6.20까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Rotator, Thermo Mixer, Ultrasonicator, Stirrer 등 기본 실험.. (6.30까지)
셀레믹스 셀레믹스
BTSeq Contiguous Sequencing 서비스 런칭 이벤트 - 무료 분석서비스(1만 마일리지) 제.. (6.30까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (8.8까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
1/6  좌우
242,400230,300
131,900125,400
870,000
370,000333,000
339,400322,500
493,000443,700
49,00041,700
17,00014,500
482,000433,800
468,000421,200
23,00019,600
482,000433,800
52,60050,000
101,10096,100
50,00047,500
787,400748,100
262,500249,400
739,000702,100
6,0005,100
79,50075,600
109,00098,100
92,30087,700
125,500119,300
924,000
최근등록   더보기 >
속슬렛 추출실험중인데   06.01
UPLC 컬럼 인터넷 주문 가능한 곳 있나요?   06.01
HepG2 cell에 Drug treatment시 BSA 사용   06.01
접합균류 곰팡이 동정 배양 질문드립니다...   06.01
BCA Assay 계산식이 이해가 되지 않습니다..   06.01
cell culture media 변경 관련 질문드립니다..   06.01
도움 부탁드리겠습니다. virus 실험   05.31
skin cell culture가 잘 진행되었는지 판단하는 biomarker가 무엇인가요   05.31
uplc column 막힘 문제 해결   05.31
H&E stainig 현미경 사진 분석   05.31
밀테니바이오텍 코리아
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
머크