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Colony PCR이 잘 되는 cell은 G(-) bacteria > G(+) bacteria > yeast입니다.
1kb의 위치가 어디 쯤인가요?
yeast colony PCR 할 때는 초기 denaturation step을 길게 줘야합니다.
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레벨3
레비나스
(대학생)
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20.02.17 15:26
안녕하세요 speed님
다시 확인해보니 위에서 10번째 되는 band가
1kb입니다. colony pcr 결과를 확인해보니 1kb도 안되는 것 같군요...
denaturing time은 30초 정도로 했는데 더 길게 해야 하나요??
transformation을 다시 해봐야 할까요? 아니면 cell을 키운 후
PCR을 다시 해본다면 결과를 얻을 수 있을까요?
액체배양이나 고체배양 cell의 경우 동일합니다.
1. 어느정도 cell 양을 사용하는지가 중요합니다.
cell 양이 적어야 결과가 잘나옵니다.
2. 1st cycle은 98oC, 5min, 2nd cycle 부터는 현재 protocol로 진행해 보세요.
결과가 잘 안나오면 다른 방법을 알려드리겠습니다.
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레비나스
(비회원)
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20.02.17 16:30
speed님 답변 감사드립니다.
일단 다른 배지에 긁어 놓은 colony를 오늘 YPD에 접종해서
내일 gDNA를 추출한 후 PCR을 다시 돌리기로 방향이 정해졌는데,
내일 이렇게 진행한다면 결과가 다르게 나올 수 있을까요??