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 전체 > Molecular Biology-RNA > mRNA Analysis
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질문 nanodrop으로 c-DNA 농도 측정 가능한가요?
올챙이뿌뿌(대학원생)  |  02.15 22:45

RNA 추출해서 샘플들 정량해서 동일하게 맞추어 c-DNA 합성했습니다.

그리고 qRT-PCR 진행하려고 하는데 c-DNA 농도가 너무 높아도 안좋다고 알고있는데 그러면 c-DNA 농도를 어떻게 측정하나요?

nanodrop으로 가능한가요? 안된다고 알고있는데...

혹시, 된다면 농도는 어느정도 맞춰서 qrt-pcr 하면 될까요?

그리고 안된다면 어떻게 농도를 맞춰서 사용하나요?

#mRNA
 
#c-DNA
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이tjioo;  |  02.16 08:53  

nanodrop으로 RNA, DNA 다 농도 잴 수 있는데 왜 cDNA라고 안된다고 들으셨는지요? option을 DNA로 맞추고 ssDNA인지 dsDNA인지 option을 맞춰서 재시면 됩니다. 

개구리지나가는사람  |  02.16 11:06  

ss DNA 항목으로 측정하시면 됩니다 ^^

cDNA  |  02.18 07:04   

RT후 cDNA 농도는 별도의 purification을 하지 않는다면 잴수가 없습니다.

그냥 RNA 농도랑 같다고 생각하시고 실험 진행하시고, 혹시 문제가 있다면 qPCR결과 토대로 보정하는 것이 좋겠죠.

jj  |  02.20 16:53   

저도 측정이 안되는걸로 알고있는데 다들 정확한 정보 맞나요? 

또돋  |  02.20 19:22   

우선, 나노드랍으로 dNTP 가 잔뜩 섞여있는 mixture에서 PCR product만 나노드랍으로 측정가능한가요..? 그 부분은 저도 몰라서.. 혹시 아시는 분 있으면 저도 알려주세요. 잠깐 찾아봤는데 모르겠네요.

제가 아는것만 의견 드리겠습니다. 정확하지 않으니 교수님또는 실험방 선배와 상의하셔서 해결하심이 좋겠습니다.

1. 정확한 농도 측정이 필요없으시다면 그냥 serial dilution하셔서 고농도에서부터 저농도까지 qRT-PCR 돌려보면 됩니다. 원하는 적당한 농도 range를 잡으실 수있습니다. 이럴 경우에는 5-fold 또는 10-fold serial dilution으로 진행합니다.

2. agarose gel 전기영동해서 밴드의 두께와 진하기로 얼추 농도를 가늠해볼 수 있습니다. 물론 size marker 또는 정확하게 농도를 알고있는 DNA 와 비교하여 대략적 측정이 가능합니다. (절대 신뢰는 불가하나 어느정도구나~ 할 수 있습니다) 프로그램 쓰셔서 intensity 측정하면 더 정확합니다.

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