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레벨5
지나가는사람
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20.02.13 22:10
이 답변을 드리기 위해... 선생님께서 사용하고 계신 세포와 항체(cat.no) 를 알려주세요~ 그래야만 답변이 가능할 것 같습니다.
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레벨2
difivka
(대학원생)
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20.02.13 23:37
세포는 panc-1
항체는 santa cruz. sc-271384 입니다
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레벨5
지나가는사람
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20.02.14 10:39
선생님~ 위 Ab는 FACS 에 사용할 수 없는 Ab 입니다~ FACS 용 Ab를 사용하셔야 될 것 같습니다.
한번 더 확인해보시는 것이 좋을 것 같습니다.
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레벨2
difivka
(대학원생)
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20.02.16 20:18
아 sc-271384FITC 입니다
이것도 facs에 사용못하나요?
enolase가 surface에 expression하나요?
glycolysis에 관련있는 enzyme인데요..
항체가 작동하는지 확실한 positive control을 원하시면
PFA와 Triton으로 처리하신후에 staining시켜서 보시면 될거 같습니다.
여기서 잡힌다면 surface에는 expression이 되지 않는 것이겠죠..
그리고 기본적으로 SC antibody는 별로 권장하지 않습니다.
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레벨2
difivka
(대학원생)
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20.02.17 11:56
네.. panc-1에 surface expression 한다는 논문이 있어서 positive control로 사용한것인데 .. 잡히지 않아서요 ..
항체문제일까요 ?
항체 quality가 안좋아도 아예 안나오지는 안습니다.
그리고 surface expression되는 단백질도 cell 내부에서도 잡히는 경우가
많습니다.
우선 cell membrane을 회수해서 detection한번 해보세요.