실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
pAMPK induction이 보이지 않습니다
레벨1 밍크 (대학원생)
안녕하세요, AMPK signaling에 대해 연구하고 있는 대학원생입니다.
요새 immortalized MEF(mouse embryonic fibroblast)를 glucose starvation 시킨후, pAMPK induction 을 WB으로 확인하려고하는데요.
몇번을 해봐도 pAMPK induction 이 보이지 않습니다 ㅠㅠ
셀문제인가 싶어 early passage셀을 써봐도, 남아있는 glucose가 문제인가싶어서 starvation할때 DPBS로 박박닦아봐도, pAMPK blot이 꿈쩍도하지않네요 ㅠ
혹시 같은실험을 해보신 분들의 조언을 구합니다. lysis buffer는 RIPA로, PIC과 같은 것들은 harvest 직전에 넣어주고 있고, no glucose media는 Gibco의 11966025를 사용햇고, pAMPK antibody는 CST의 2535제품을 사용하고있습니다.
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