실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
RNA isolation에 관한 질문입니다.
레벨2 오디야 (대학생)
안녕하세요 저는 현재 석사 1학기에 재학중인 학생입니다.
Mouse liver tissue에서 RNA isolation을 수행하던 도중 궁금한 점이 있어 질문드립니다.
배양세포와는 달리 mouse tissue 샘플에서 RNA를 뽑을 때는 확실히 debris들이 많은 것을 확인했습니다.
RNA pellet을 dry 시켜도 계속 하얗고 불투명한 것이 RNA 외의 다른 단백질이나 지방과 같은 debris들이 많이 섞여있습니다.
그래서 Trizol에 RNA를 갈은 후 Chloroform을 넣고 수층을 분리 하면 그안에 RNA가 있다고 하지만 밑의 하얀 protein band가 딸려 왔을 수도 있으니 한번더 층을 나누려고 합니다.
그래서 저의 질문은 분리한 수층에 다시 trizol을 1ml을 넣은 후 Chloroform을 넣은 후 한번 더 수층을 분리하면 될까요?
Trizol과 chloroform의 원리를 찾아보니 Trizol은 그냥 단순히 phenol이 섞인 lysis buffer이고 Chloroform은 phenol과의 친화성이 높아서 vortexing을 하면 phenol층을 분리하는 역할이라고 적혀진 것을 보았습니다.
그러면 굳이 Trizol을 한번 더 넣는 것이 의미가 있을지 아니면 둘다 넣어야하는지 Chloroform으로 분리해내는게 혹시 미량 섞여있을지 모를 phenol을 분리해 내기위함인지 구분이 가지 않아서 질문드립니다.
배양세포와는 달리 Mouse tissue에서 RNA를 분리해내는 것은 쉽지않네요..
감사합니다.
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