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3M or 5M NaOAc buffer를 사용해서 배양액 pH를 맞춰 보세요.
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(대학원생)
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20.02.07 15:40
일단 볼륨으로 pH 맞춘 뒤 mM으로 계산해보면 되는건가요???
배양액 부피를 기준으로 몇mM의 buffer가 되게 사용할지를 먼저 정해야
합니다.
예로 5M buffer를 50mM buffer가 되게 사용하려면 배양액 부피에 buffer를
1/9 vol. 을 사용하면 됩니다.
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(대학원생)
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20.02.07 16:54
제가 20 50 80 100mM까지 테스트했을때 pH가 맞지 않았습니다 ... 그럼 똑같은거 아닌가요..??
몇 M buffer를 사용하여 배양액과 혼합했나요?
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(대학원생)
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20.02.07 22:08
1M 버퍼를 사용하여 1 ml 배양액에 20 40 60 80 100 mM 이 되도록 섞었는데도 pH가 맞지 않았습니다 ㅠ 그래서 이걸 200 300 mM이 되도록 넣어도 되는건지 싶습니다...
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(대학원생)
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20.02.07 23:56
제가 오늘 테스트를 해봤는데 total volume 1 ml에 배양액을 500 ul 넣고(활성이 낮아 최대한 배양액을 많이 넣어줘야하는 상황입니다) 버퍼를 20 40 50 mM부터 해서 계속 넣어봤는데 1.2M 정도를 넣어줘야만 pH 5.2로 보정이 됩니다. 버퍼의 농도를 이렇게 높게 잡으면 안 된다고 들어서..
물어볼 사람도 없고 이것때문에 진도가 안 나가고 있어 너무 답답한 상황입니다..ㅠㅠ
바쁘시겠지만 조언 남겨주시면 정말 감사하겠습니다!
위 답변에서도 설명했듯이 높은 M의 buffer를 사용해야 소량을 사용해서
pH 보정을 할수 있습니다.
3M or 5M buffer를 사용하면 됩니다.
낮은 M의 buffer를 사용하면 배양액의 희석이 많이 되어 활성이 낮게 나올 가능성
도 있고 그렇게 되면 농축을 진행해야 합니다.