실험 Q&A Microbiology > etc.
균주 동결 관련 질문입니다.
레벨5 Arkadis (대학생)
현재 외부에서 정량된 균주를 구입해 사용하고 있는데 실험이 추가로 진행될 수가 있어서 내부에 stock을 만들어서 사용하자는 이야기가 나와서 동결균주를 만드는 방법을 검색해 보았습니다. 그중 몇가지 의문이 생겨 문의드립니다.
제가 확인한 방법에서는 균주별로 glycerol brain/heart infusion이나 glycerol medium3, antibiotic medium3 같은 것들을 사용하라고 했습니다. 그런데 정작 조성이나 비율 등 세부 내용은 안 적혀 있더군요..
1) 동결균주를 만들 때 20% glycerol 용액을 -70°C 이하에서 얼린다고 하는데 나머지 부분은 saline으로 해도 차이가 없나요? 아니면 다른 buffer(skim milk 등)를 꼭 사용해야 하나요?
2) 동결균주를 보관하는 용기는 conical tube나 E-tube로도 상관 없나요?
3) 동결할 때 균주의 양은 어느정도가 적당할까요? CFU의 제한같은건 없나요?
4) rehydration은 PBS나 saline으로 사용해도 되나요? 가능하면 농도는 어느정도가 적당할까요?
5) rehydration한 균을 3회 계대배양 후 stock을 다시 만들어도 괜찮을까요?
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