실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
gDNA 추출과정 중 buffer에 역활
레벨1 Leemem (대학생)
안녕하세요 DNA 추출을 배운지 얼마 안된 대학생입니다.
TIANGEN 사의 TIANamp Marine Animals DNA Kit 를 사용여 gDNA를 추출하는 것을 배우고있는 과정중
이 kit는 silica membrane 원리를 근거로 DNA를 추출하는데
개면활성제 성분이 있는 LYSIS BUFFER로 LYSIS과정을 끝내고
DNA정제에서 단백질과 각종 이물질들의 활성을 억제하는 버퍼를 넣고
그 다음 ABSOLUTE ETHANOL을 첨가하고 vortex와 원심분리 후 과정이 이해가 안되서 질문드려봅니다.
이전 과정 후 silica membrane에 옮겨 담은다음 또 원심분리를 하게 되면 collection 튜브에 내려오는 용액은 lysis하고, DNA를 정제하고, DNA를 에탄올 침전까지 해서 더이상 필요가 없는 용액인건 이해를 합니다.
[그다음에 silica membrane에 GD buffer (ABSOLUTE ETHANOL 17 ml 첨가 된)를 500 ul를 첨가하고 PW buffer(ABSOLUTE ETHANOL 50 ml 첨가) 600 ul
를 첨가합니다. 이 부분이 지금 이해가 안되요 ㅠㅠ]
저 GD buffer와 PW buffer의 정확한 원리를 알고 싶습니다.
PW는 불순물과 단백질, 염을 제거하는 washing버퍼인 듯한데;; 잘모르겠습니다 ㅠ
저 이후과정은 TE 버퍼를 통해 상온 incubation 후 spin down으로 DNA를 추출합니다.
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