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질문 기본적인 세포실험 관련
알서뚜니(대학원생)  | 01.22 15:56

안녕하세요.

박사과정 대학원생입니다.

Caco-2, fibroblast, C6, BC12, HL-60 세포 등 다양한 세포실험을 해왔습니다.

근데 제가 박사과정에 접어들면서 부터 실험이 계속 불안정한데요

H292 cell line으로 실험하다가 A549 cell line으로 바꿔서 요즘에 조건을 다시 잡고 있습니다.

제가 셀 카운팅 할때, 원심분리한 세포에 배지 1mL 넣고 현탁한 다음

40배로 희석해서 20~30개 정도의 세포를 카운팅해서 plate에 계대를 하는데요

지금 plate 마다 계속 조건이 다르고 안잡혀서 매우 답답한 상황입니다.

옆에 계신 분은 저한테 40배로 희석해서 20개  카운팅하는게 잘못됐다고 이래서 계속 안되는 거다 하시는데요.

이게 셀 카운팅 할때마다 20개~30개 정도로 계속 일정하게 나오고 있는데

과연 셀 카운팅할때 희석을 많이 해서 계속 조건이 안잡히고 하는거에 영향이 있는걸까요!? 저는 대체 납득이 안가서...이렇게 글을 올려봅니다.

 혹시나 A549 cell line 키우시는 분이 계시다면...96well, 48well, 24well plate에 계대할때 팁좀 부탁드립니다.ㅠㅠ 진짜....3년 내내 조건만 잡고 있습니다. ㅠㅠ

#A549 cell
 
#cell counting
 
#cell culture
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리당구왕빠킹  |  01.24 13:43  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

조건이라는 것이 세포 수에 영향을 받는 조건인가요? plate에 seeding하고 세포의 confluency는 일정한가요?

박사과정이시면 세포 관리에 있어서는 큰 문제는 없으실 것이라고 생각되니 변수가 세포 수에 의한 것이라고 가정하면, 아무리 정교하게 해도 희석배수가 크면 오차가 클 수 밖에 없습니다. 오차 줄이시려면 희석배수를 줄여보시는 것이 좋아보입니다.

알서뚜니  |  02.03 13:58  

감사합니다.

앞으로 오차를 줄이기 위해 셀 카운팅할때 희석을 좀 적게해서

실험 중에 있습니다.

 

confluency는 항상 비슷했는데요, 자극에 따라서 유도될 때가 있고 안 될 때가 있고 그러더라구요.. 좀 더 하나하나 따져봐야겠어요!

감사합니다^^

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