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질문 Cobalt resin을 이용한 단백질 정제를 위해 버퍼를 제조하려고 합니다
알뿌꾸뿌꾸빵빵(대학원생)  | 01.21 14:03
정제 과정중에 두가지 버퍼가 필요한데, 코발트레진 프로토콜 상에서는
1. Equilibration/Wash buffer (pH7.4)
-50mM sodium phosphate
-300mM sodium chloride
-10mM imidazole

2. Elution buffer (pH7.4)
-50mM sodium phosphate
-300mM sodium chloride
-150mM imidazole

이렇게 두가지 종류의 버퍼가 필요하다고 합니다 ,
그런데 이렇게 여러종류의 시약으로 각각 500ml의 버퍼를 만든다고 할때 제조방법을 모르겠어서요,,
각 용액을 몰농도에 맞추어 만들고 섞어야하는건지,
하나의 바틀에 파우더를 넣고 500ml을 맞추어 섞어야하는지요..


특히 50mM sodium phosphate같은 경우 Mono와 Di를 섞어서 제조한다고 하는데
전혀 방법을 알수가 없어서요.. 답변 부탁드립니다
#Buffer
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.21 23:25  

우선 phosphate buffer를 만들어야 합니다.

pH7.5 50mM Na-Phosphate buffer

400ml의 DW에 아래의 두 성분을 넣고 pH를 측정합니다.

1M Na2H 38.7ml

1M NaH2 11.3ml

pH7.4가 되는지 확인 후 Di-, Mono- basic을 소량 추가하여 pH를 7.4로 보정한후

500ml까지 부피를 DW로 맞추면 됩니다.

이후 NaCl, imidazole을 농도에 맞게 녹이면 됩니다.

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