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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western sample 처리 질문입니다.
올챙이잉ㅇ이앙(대학생)  |  01.20 17:13

Western blot 단백질 추출 전 자극물질과 sample 처리하실 때 어떻게 하시는지 궁금합니다.

논문을 읽으면 전처리를 한다고 나와있는데 다음 방법 중 어느 방법으로 하시는지 댓글 부탁드립니다.

Well 1개 당 400ulvolume

최종 100ng/mlLPS100ug/mlSample을 처리한다고 가정,

 

전처리 (Sample) : 100ug/ml Sample 200ul

 

-> 전처리 후, 전처리로 깔려진 100ug/ml Sample 200ul 위에 100ng/mlLPS 200ul 분주

 

혹은

 

-> 전처리 후, 전처리로 깔려진 100ug/ml Sample 200ul 제거 후, 100ng/mlLPS 200ul + 100ug/mlSample 200ul 분주

 

혹은 전처리 없이 100ug/ml Sample + 100ng/ml LPS 400ul 동시 처리

 

답변부탁드립니다!

#western blot
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대왕개구리안재진  |  01.20 17:43  

실험 디자인 및 결과에 따라 다르겠지만...

저는 기본적으로 약물처리하고 1시간 정도 뒤에 LPS를 추가하는 방법을 기본방법으로 진행합니다.

물론 약물의 효능에 따라 LPS를 먼저 처리하고 그 뒤에 약물을 추가하기도 또 이 둘을 동시에 처리하기도 하지만

가장큰 효능을 얻기 위해서 약물처리 그 뒤에 LPS를 처리하는 방법으로 진행하고 효능이 좋다면 동시나 선 LPS 처리를 추가로 진행하기도 합니다.

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