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오염되거나 gel loading할때 다른 sample과 섞이지 않는 한 negative control에서 밴드가 나오면 안됩니다.
하지만 이런 현상은 왕왕 나옵니다.
파이펫, 팁, 튜브, buffer, DW 모두 바꿔서 해야 해결되는 문제입니다.
글로브도 끼고 마스크도 하면 더 좋습니다.
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레벨6
Applied_Microbe
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20.01.20 13:26
Positive control이 Ladder처럼 나오면 문제가 있는거 아닌가요?
annealing temp를 좀 올려보셔야 할 거 같은데요...
multiplex PCR인거 같은데... 실험구에서 double band가 나오는게 맞는건가요?
Negative control이 positive control에 오염된것 처럼 생각되네요
실험 정보를 더 주시는게 판단에 도움이 될 것 같네요
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레벨2
병원성미생물
(과기인)
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20.01.20 13:41
Positive Control은 정확하게 나왔습니다.
Multiplex 키트라서 더블밴드가 나옵니다.
multiplex PCR이라 여러 band가 나오는 것은 정상이며 negative는 말 그대로
아무것도 안나오는 group입니다.
PCR tube를 만들 때 tube끼리 거리를 조금 두고 실험해 보세요.
그리고 tip 버리는 것도 PCR tube와 거리를 두는 것이 좋구요.
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레벨2
병원성미생물
(과기인)
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20.01.20 14:49
혹시 전기영동 하기전에
gel 홈에 분주할때
홈안에 정확하게 전 볼륨다 안들어가고
버퍼용액에 퍼지듯이 약간 샜을때도 영향이 생길까요?
well에 loading할때도 항상 well 간의 혼입을 주의해야 합니다.
하지만 첨부한 전기영동은 product 7 다음에 negative이기 때문에 서로 혼입된것
같이 보이지 않습니다.
PCR의 오염경로를 뺀 가정하에 다른 가능성을 말씀드리자면
강시님 답변같이 여러 가능성이 있을것 같아요.
무엇보다 네거티브로 썼던 D.W의 오염가능성이 커보이네요
D.W를 새로 멸균을 해서 사용해보세요