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질문 일반PCR후 전기영동 Negative Control 띠형성 이유?
올챙이병원성미생물(과기인)  |  01.20 09:29
첨부파일 파일첨부: 123123123123.jpg (27 KB)
이미지 첨부파일

사진은 아래와 같습니다.

1번레인 : 사이즈마커

2번레인 : Positive Control

3,4,5,6,7번레인 : Product

8번레인 : Negative Control 

 

 

 

병원성미생물 multiplex 키트를 사용해서

일반 PCR 을 하고있습니다.

 

원래는 네거티브 컨트롤에서 아무것도 뜨지 않는것이 정상인데

같이 PCR 돌리고 같이 전기영동한 다른 gel 에서는 네거티브가 정상적으로 띠형성이 되지 않았는데.

사진의  겔만 네거티브 컨트롤에서 띠가 형성되어서 질문드립니다.

 

1. PCR 까지 오염경로가 없는 경우를 가정해서.
네거티브 컨트롤에 띠가 형성될수있는 경우가 어떤것이 있을까요?

 

 

 

#PCR
 
#전기영동
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  01.20 09:33  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

오염되거나 gel loading할때 다른 sample과 섞이지 않는 한 negative control에서 밴드가 나오면 안됩니다.

하지만 이런 현상은 왕왕 나옵니다.

파이펫, 팁, 튜브, buffer, DW 모두 바꿔서 해야 해결되는 문제입니다.

글로브도 끼고 마스크도 하면 더 좋습니다.

꽃개구리Applied_Microbe  |  01.20 13:26  

Positive control이 Ladder처럼 나오면 문제가 있는거 아닌가요?

annealing temp를 좀 올려보셔야 할 거 같은데요...

multiplex PCR인거 같은데... 실험구에서 double band가 나오는게 맞는건가요?

Negative control이 positive control에 오염된것 처럼 생각되네요

 

실험 정보를 더 주시는게 판단에 도움이 될 것 같네요

올챙이병원성미생물  |  01.20 13:41  

Positive Control은 정확하게 나왔습니다.
Multiplex 키트라서 더블밴드가 나옵니다.

대왕개구리SPEED  |  01.20 14:01  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

multiplex PCR이라 여러 band가 나오는 것은 정상이며 negative는 말 그대로

아무것도 안나오는 group입니다.

PCR tube를 만들 때 tube끼리 거리를 조금 두고 실험해 보세요.

그리고 tip 버리는 것도 PCR tube와 거리를 두는 것이 좋구요.

올챙이병원성미생물  |  01.20 14:49  

혹시 전기영동 하기전에

gel 홈에 분주할때

홈안에 정확하게 전 볼륨다 안들어가고

버퍼용액에 퍼지듯이 약간 샜을때도 영향이 생길까요?

대왕개구리SPEED  |  01.20 15:02  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

well에 loading할때도 항상 well 간의 혼입을 주의해야 합니다.

하지만 첨부한 전기영동은 product 7 다음에 negative이기 때문에 서로 혼입된것

같이 보이지 않습니다.

꽃개구리착한사람  |  01.20 17:48  

PCR의 오염경로를 뺀 가정하에 다른 가능성을 말씀드리자면

강시님 답변같이 여러 가능성이 있을것 같아요.

무엇보다 네거티브로 썼던 D.W의 오염가능성이 커보이네요

D.W를 새로 멸균을 해서 사용해보세요

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