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질문 mouse blood PBMC 분리했는데, 깨끗하게 분리가 안 됩니다..
알따르릉(대학원생)  |  01.18 12:40

안녕하세요

mouse blood에서 PBMC 를 분리하고 있는 연구원입니다.

Ficoll-Paque 를 이용했고 Ficoll 12ml 에 희석된 blood 12ml 정도 overlay 하여 900g 10분 centrifuge 하였습니다.

두 마리에서 똑같이 blood를 뽑아 똑같이 걸었는데, 이유는 모르겠는데 하나는 중간 층이 하얗게 분리가 되었고, 하나는 거의 투명한 흰색으로 분리가 되었습니다. (안타깝게 사진이 없네요)

그래서 각각 interphase를 분리한 후 바로 현미경으로 봤는데

interphase가 하얗게 분리가 된 샘플은 아래 첫번째 사진과 같이 셀도 보이지만 바닥에 뭐가 잔뜩 깔려 있었습니다. 반면 interphase가 투명한 흰색으로 분리가 된 샘플은 두번째 사진과 같이 셀만 깨끗하게 보이고 바닥에 아무것도 깔려있지 않았습니다.

바닥에 있는 지저분한 것들이 platelet인가? 싶어서, 이어서 washing을 진행했고, 그 후 다시 현미경으로 관찰해도 똑같이 바닥에 지저분한 것들이 많이 있었습니다. 

도대체 두 마리에서 똑같이 피를 뽑아 centrifuge를 돌렸는데, 왜 하나는 하얀 층이 생기고 하나는 투명한 하얀 층이 생겼으며,

왜 하얀 층에서는 저렇게 바닥이 지저분한 게 보이고, 투명한 하얀 층에서는 깨끗하게 분리가 될까요?

혹시 이유 아시는 분 조언 좀 부탁드립니다. 어떻게 해야 항상 깨끗하게 분리할 수 있는지요...

upload_image

#PBMC
 
#mouse blood
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