실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
cloning에서 restriction 처리 관련해서 질문이 있습니다.
레벨3 레비나스 (대학생)
안녕하세요.
pPICZaC vector와 insert를 cloning 하였고 transformation 후에 콜로니가 뜬 것을 확인할 수 있었으며, cloning한 것을 colony pcr 했을 때 band가 모두 뜬 것을 확인할 수 있었습니다. band도 제가 원하던 size인 1kb 가까이에서 나왔습니다.
어제 inoculation 후 오늘 mini prep을 진행하였고, xba1과 EcoR1으로 처리를 하였는데 제가 예측한 곳과 전혀 다른 band가 나왔습니다. restriction enzyme으로 잘렸다면 3.5kbp 부근과 375bp에서 band가 나와야 하는데 나오지 않더군요... 4kb 부근에서 나온 band는 잘리지 않았고, 4kb 이상인 band는 밑에 band가 하나 더 나왔지만 제가 원하던 사이즈는 아니였습니다.
restriction enzyme은 3시간 정도 처리하였으며, xba1과 EcoR1을 cutsmart buffer에서 같이 처리하였습니다. mini prep을 잘못해서 저런 결과가 나온 것일까요?
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