실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Extraction/Isolation
Polymersome(polymer vesicle)에 로딩되지 않은 항암제 분리하는 방법...
레벨1 새해엔 (대학원생)
안녕하세요 지금 진행하고 있는 실험이 polymer로 만든 입자인 polymersome에 항암제인 doxorubicin을 담지하는 건데요, 담지까진 했는데 그 이후가 문제입니다ㅠㅠ로딩효율을 알려면 담지되지 않은 free-drug를 제거해야하는데 그 방법에 있어서 고민이네요. 제가 크게 3가지 방법으로 진행해봤는데
1. Centrifugation
이거는...일단 pellet자체도 얼마 되지 않고 self-assembly로 만들어진 입자를 물리적인 힘으로 크게 가하면 입자가 부서질거 같아서 하다가 중단했습니다.
2. Membrane dialysis
이거도 진행을 했는데, 문제는 이렇게 해서 free-drug를 제거하고 남은 sample로 in-vitro 실험을 하는데 과연 이게 맞는 방법인가 의문이 듭니다. Membrane dialysis랑 in-vitro랑 유일한 차이점이 in-vitro같은 경우는 온도 37도로 한다는 점과 membrane dialysis는 상온에서 한다는건데..중복된 방법으로 과연 free-drug를 제거하는게 맞는 방법인지 의문이 듭니다.
3. PD-10 column
마지막이 PD-10 column으로 크기가 작은 항암제가 나중에 빠지도록 하는 방법인데 이 방법이 가장 실용적일 거 같아서 현재 진행중인데 여기도 몇가지 궁금한 점이 있습니다. 먼저 실험을 진행해봤는데 문제점이 용매가 제일 먼저 빠져나오는데 그 다음에 입자가 빠져나오질 않습니다..2일이 지났는데도 column에 걸려있고 빠져나오질 않고(항암제도 마찬가지입니다) 있네요. 그 다음 궁금한점은 이렇게 빠져나온다고 해도 이걸 어떤 시간을 기준으로 분리해야할 지 의문이 듭니다.
길지만 혹시 알고 계신분은 답변해주시면 정말 감사하겠습니다 ㅠㅠㅠ계속 찾아보고 있는데 잘 모르겠네요...참고로 입자 크기는 대략 150~200nm정도입니다.
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