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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 TA cloning에 대해서 궁금한 것이 있습니다.
알레비나스(대학생)  |  01.11 23:30

안녕하세요.

저는 학부생으로서 자대 랩실에서 실험을 배우고 있습니다.

TA cloning에 대해 궁금한 것이 있어서 여쭤보고 싶습니다.

제가 했던 실험은 T-vector에 insert를 넣은 후 pcr 및 transformation을 했으며

colony pcr을 통해 insert가 T-vector에 ligation이 잘 된 것을 확인할 수 있었는데요

궁금한 것이 2가지 있습니다.

1. T-vector에 insert가 거꾸로 들어가는 것은 실험에 별로 영향을 미치지 않나요? T-vector에 insert가 거꾸로 들어가게 되면 생기는 현상에 대해 알고 싶습니다.

2. colony pcr을 했을 때 insert 보다 size가 큰 것을 보고 ligation이 제대로 되었다는 것을 확인할 수 있었는데요, colony pcr을 할 때 사용하는 primer는 insert보다 앞 쪽에 붙는(T-vector 쪽) 것으로 design을 해야하는 것 인가요?

#실험
 
#TA cloning
 
#colony pcr
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  01.12 10:35  

1. TA coning vector는 보통 클로닝이 어렵거나 농도가 낮은 DNA를 클로닝할때 사용하는 벡터입니다.

또는 PCR primer 양 말단에 제한효소 sites를 넣었지만 제한효소로 잘 잘리지 않는 경우에도 사용합니다.

TA cloning 후에 insert를 제한효소로 잘라서 많은 양의 insert를 얻으면 원하는 벡터에 클로닝하기 쉽우므로 이런 TA cloning 벡터를 사용합니다.

그래서 insert가 어느 방향으로 들어가든 아무 상관이 없습니다.

종종  원하는 벡터의 cloning site를 blunt end로 자르고 T를 붙여서 PCR로 증폭한 insert를 직접 삽입하는 방법도 사용하는데 이때는 클론 여러개를 분석해서 방향이 맞는 것을 골라냅니다.

 

2. insert가 들어간 것을 확인하기 위한 PCR은 크로닝할때 사용한 PCR primer를 사용해도 되고 TA 벡터의 클로닝 sute 양쪽에 위치한 서열에 붙는 primer를 사용해도 됩니다. 그 둘을 하나씩 섞어서 사용해도 됩니다.

알레비나스  |  01.12 11:05  
답변 감사드립니다 ㅎㅎ
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