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질문 일반 pcr에서 샘플 믹스 계산하는 방법.
개구리동물학전공(과기인)  | 01.11 14:02
일반 PCR에서 dna랑 버퍼 물 프라이머 계산 어떻게 하나요?
#PCR
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.12 11:27  

프리믹스 제품을 사용하지 않고 직접 혼합해서 사용할 경우 mixture 총량을

먼저 정해야 합니다.

20ul로 할지 30ul 할지 등

그후 buffer는 10X를 보통 사용하기 때문에 mixture 총량의 0.1을 넣으면

됩니다.

dNTP는 4종류 각 200uM로 사용하면 됩니다.

primer는 0.1uM에서 1uM사이에서 사용하고 template DNA는 연구자 마다

선호하는 농도는 다르지만 부피는 1ul를 넣어주면 됩니다.

Taq pol.은 1.25unit/50ul 정도 넣으면 됩니다.

위 구성 성분 중 buffer와 dNTP 농도 외에 template DNA, primer, taq의 농도는

가변성이 있습니다.

따라서 20ul mixture를 만들 경우 

20 - (template DNA + buffer 2ul + primer + dNTP + taq) = DW가 됩니다.

직접 혼합헤서 사용하는 것 보다 요즘은 premixe 제품도 저렴하게 많이

판매하기 때문에 편리할수 있습니다.

아래 사이트를 참고해 보세요.

https://international.neb.com/protocols/0001/01/01/taq-dna-polymerase-with-standard-taq-buffer-m0273

꽃개구리Applied_Microbe  |  01.13 09:19  

abiho@daum.net 로 메일 주시면 제가 Takara 에서 나왔던 PCR 백전백승 이란 실험서 하나 보내드릴께용 거기에 잘 나와요

개구리지나가는사람  |  01.13 09:32  

20ul 기준 (kit 사용시 primer master mix - invitrogen)

DNA : 1 or 2 ul (RNA 농도 기준 ; 1000ng/ul - 2000ng/ul)

Fw : 1 ul
Rev : 1 ul

dNTP 150~200 uM

Taq pol.은 1 unit 정도 넣으면 됩니다.

나머지는 DW 넣으시면 됩니다.

이렇게 진행합니다.

그리고 Primer mixture 제작시 sample 양의 10% 정도 더 준비하세요.

ex) 10개 samples 분석시 11개 samples 분석할 양을 만들어서 사용

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