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 전체 > Molecular Biology-DNA > etc.
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질문 DNA extraction 시약 질문입니다.~!
알dkswpqkr(대학원생)  | 01.10 15:15

제가 이제 입학해서 처음으로 실험을 진행하는데, 심해 퇴적물에서 dna를 추출 하려고 protocol 찾아서 진행 하면서 몇가지 모르는게 있어서 질분 드립니다.

1.phenol(Tris-HCl,PH7.4)를 주문 하려했는데 배송이 3개월 넘게 걸린다하여 직접 만들려고하는데 만드는 법좀 알려 주실수 있을까요???

제가 사려고 했던 사이트는 아래 사이트입니다.

https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/15513039

 

2. 2ml 0.15M NaCl,0.1M EDTA(PH8.0),15mg/ml lysozyme

이렇게 되어 있으면 각각 얼마나 넣으라는 건가요?????

3. 제가 eukaryote dna를 추출해야하는데 제가 찾은 sediment protocol은 bacteria 추출인거 같아서 혹시 추가하거나 변경해야하는 부분이 있을까요?

아래 제가 찾은 protocol 첨부했는데 답변 부탁드립니다.upload_image

#DNA Extaction
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  01.10 19:45  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1. DNA 추출용 phenol은 실험실에서도 준비할 수 있습니다.

구글에서 phenol saturation이라고 검색하면 나오는 방법입니다.

http://ieg.ou.edu/protocol/Protocols/Phenol%20Saturation.pdf

protocol에서 나오는 8-hydroxyquinoline은 안넣어도 됩니다.

 

2. 2ml 0.15M NaCl,0.1M EDTA(PH8.0),15mg/ml lysozyme

0.15M NaCl,0.1M EDTA(PH8.0) buffer를 2ml 넣으라는 말입니다.

이때 lysozyme을 15mg/ml 넣으라고 했으니 30mg lysozyme powder를 넣어주거나 위 buffer에 미리 만들어 놓은 lysozyme solution을 최종 30mg이 되도록 넣어서 사용하라는 의미입니다.

 

3. 위 프로토콜에서 lysozyme을 빼면 eukaryotic DNA 추출에 사용할 수 있습니다.

하지만 심해퇴적물에 어떤 진핵생물이 있는지, 가령 단단한 껍질을 가진 diatom 같은 algae가 있는지 모르며, 껍질이 있는 생물은 껍질을 깨주는 과정이 필요한지 등의 정보를 관련 논문을 찾아서 참고해야할 것입니다.

꽃개구리느림보  |  01.12 08:14  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
페놀 버퍼 처리가 폐수가 많이 발생하고 건강에도 좋지 않습니다. 가격이 문제가 아니라면 국내 제품 중에서 재고있는지 찾아보세요. 예를 들어 바이오*상. 바이오*아 이런데서 다 팔고 있습니다.
대왕개구리SPEED  |  01.12 11:00  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

버퍼화된 페놀에 산화 방지제를 넣지 않아 산화되면 DNA에 손상을 줍니다.

페놀 버퍼 만들 때 발생한 폐수는 처리 하는 것이 아니라 지정 페기물로 폐기 업체에 의뢰해야 합니다.

중성 pH로 평형화하는데 염청난 양의 buffer가 소요되기 때문에 구매 해서 사용하는 것이 편리합니다.

 

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