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질문 qPCR metling curve 질문드립니다
알밍맹뭉(대학원생)  |  01.10 00:29
첨부파일 파일첨부: 제목 없음.png (16 KB)
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qPCR 멜팅 커브 그래프가 저렇게 나왔습니다 
픽은 77로 다른 프라이머들에 비해 빨리 멜팅 되었구요... 
딱히 다른 프라이머들보다 길이가 짧다거나 GC 값이 높다거나 이런 특이성은 없었습니다.. ㅠㅠ 

두 가지 의문점이 남습니다...

1. 비슷한 프라이머들에 비해 77도에서 빨리 멜팅된 이유는 뭐가 있을까요? 
2. 멜팅이 빨리 되었다고 해도 그래프가 깔끔하면 좋은데 픽을 찍고 그 뒤도로 작게 한번 더 굴곡이 생긴 건 어떤걸 의미하는건가요?

 

발그림 죄송합니다 ㅠㅡㅜ

#qPCR
 
#Primer
 
#melting curve
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꽃개구리느림보  |  01.10 12:01  

Tm이 77도라면 primer-dimer 피크일 듯 합니다만, PCR 증폭물이 이차구조를 형성하는 경우도 배제할 수 없습니다. qPCR의 여러 측면을 Melting 분석만으로 다 해석하기가 어렵습니다. 간단히 2-3% 정도의 아가로즈 젤에 걸어 보면 답이 나올 것 같네요. 

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