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질문 HaCaT cell에 C.acnes 처리
알뽀로로대학원생(대학원생)  |  01.09 16:23

안녕하세요. 실험에 진전이 없어서 답답한 대학원생입니다.

먼저, 제가 하는 실험은 HaCaT cell(keratinocyte)에 Heat killed한 C,acnes를 처리해서 염증성 반응을 보는 것입니다.

그런데, 처리 후 qPCR을 이용해 TLR2와 IL-8을 확인해보면 전혀 증가가 없습니다.

그래서 저는 1.균을 액체배지에 키워서  2.균을 고체배지에 키워서  3.Heat killed 온도를 50, 80도로 조절해서  3.incubating 시간을 줄여서 or 늘려서  4.cell medium을 줄여서(2ml->1ml)  4.균 수를 늘려서 (100MOI->500MOI) 실험을 다 바꾸어 보았지만, 여전히 그대로입니다..

혹시 C.acnes를 HaCaT cell에 treat 해본 경험이 있으신 분들 중에 저에게 도움을 주실 수 있는 분 없을까요?

#균처리
 
#C.acnes
 
#HaCaT
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.09 16:51  

균 처리 농도는 어떻게 되나요?

그리고 Positive control로 어떤 물질을사용하나요?

알뽀로로대학원생  |  01.09 17:11  

균처리 농도는 100MOI(cell 2x10^5/bacteria 2x10^7)로 처리하고 있습니다.

혹시 균이 적은가 싶어 이번에 500MOI까지 처리해보았으나 변화 없었습니다.

Positive control은 있던 LPS가 5년동안 aliquot한 채로 냉동보관했더니 활성을 잃어 LPS를 Escherichia coli 026:B6 (Sigma)를 주문한 상태입니다. (아직 Positive control에 대한 실험은 제대로 진행되지 못했습니다.)

 

 

대왕개구리SPEED  |  01.09 17:26  

1. TLR2는 LPS와 관계가 없기 때문에 LPS를 처리하려면 TLR4를

확인해야합니다.

2. TLR2는 PGN을 처리해야 하기 때문에 positive control로 PGN을 구매해서

사용하는 것이 좋습니다.

3. 균은 100도의 물에서 30분 정도 처리한 균과 초음파로 파쇄한 후 균을

dry해서 처리(10~30ug/ml)해 보세요.

균이 파괴되어 PGN이 노출되는 것이 TLR2 자극에 좋습니다.

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