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PCR의 anneling temp.는 정해져 있는 것이 아닙니다.
증폭이 잘되는 온도에서 PCR을 진행하면 됩니다.
증폭이 잘 안되는 온도에서는 cycs이 많아진다고 증폭이 잘되지는 않습니다.
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레벨2
jchjhjhk
(대학원생)
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20.01.08 14:41
하지만 모든 온도에서 동일한 밴드의 density를 보이는 경우는 어떻게 해야하나요?
가장 높은 annealing온도를 선택해서 수행해야하나요?
증폭 가능한 온도 범위에서 어느 온도도 무방합니다.
저 같은면 낮은 온도로 할 것 같습니다.
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레벨2
jchjhjhk
(대학원생)
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20.01.08 14:57
낮은 온도로 하시는 이유가 있을까요?
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레벨6
Applied_Microbe
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20.01.08 15:48
Annealing temp. 높은데.... Cycle 수가 많으면 그럴 수는 있습니다
글구.... 특이도가 높기 때문에 annealing temp. 가 높아도 진하게 나온것 같네요... 저라면 높은 온도로 갈거같아요 혹시모를 mismatching을 방지하기 위해서요..... cycle 수를 높게 해야한다면요... 만약에 cycle수를 낮게 조정하게된다면 그에 따른 band의 강도를 다시 확인하시는게 좋을 듯 합니다.
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레벨5
CHINyo76_philekorea
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20.01.10 15:51
위의 여러 분들의 답변대로 일정 범위 안에서 타깃 밴드가 모두 잘 나온다면 크게 고민 하실 필요는 없어 보입니다.
target band를 gel-purification 하실 거면 비교적 높은 온도에서 진행하시는 것이 좋을 것 같습니다.
확인을 위해 적은 volume을 loading 했을 때는 보이지 않았던 non-specific band가 확인 되지 않지만 간혹 volume이 많아지면 희미하게 보이는 경우도 나타날 수 있습니다. non-specific band 농도가 낮아서 확인이 어려울 뿐 증폭되는 경우도 있으니 저의 경우에는 비교적 높은 annealing temp에서 진행하겠습니다.