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 전체 > Plant Biology > Transformation
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질문 LB broth cell culture 질문이요 ㅠㅠ
알epwkdhk(대학생)  |  01.07 10:59

지금 거의 혼자 하고있는데 학생이라,,ㅜㅜ

transformation을 위해 LB broth 3mL에 e.coli vector를 O/N키우려 하는데

몇 마이크로리터를 넣어줘야 하나요? km50은 얼마나 넣어줘야 하나요?ㅜㅜ계산이 어려워요,,

 

#cell culture
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  01.07 15:10  

transformation을 위해 LB broth 3mL에 e.coli vector를 O/N키우려 하는데

 

=> E. coli는 벡터가 아닙니다. 벡터는 보통 plasmid 등을 말합니다.

E. coli는 host라고 하지요.

이 질문은 competent cell을 만들기 위한 거지요?

그러면, LB broth 3 ml에 대장균을 조금만 접종하세요.

액체배양중인 것이 있다면 그냥 멸균된 루프로 찍어서 접종하거나 5ul 정도 따서 접종하세요. plate에 자라는 E. coli라면 루프나 팁으로 콕 찍어서 접종하세요.

어차피 이 배양은 seed culture이기 때문에 E. coli 1 마리만 접종해도 됩니다.

그리고는 하룻밤 동안 배양하세요.

 

몇 마이크로리터를 넣어줘야 하나요? km50은 얼마나 넣어줘야 하나요?ㅜㅜ계산이 어려워요,,

km50이 뭐죠?

질문은 일반적으로 사람들이 알아들을 수 있는 용어로 자세히 설명해야 좋은 답이 나옵니다.

지나가다..  |  01.07 15:44   

용어를 정확히 파악하여 질문을 정확히 남겨주셔야 할듯합니다. ^^;;

 

transformation할때 사용할 plate를 만드려 하는데..

이때 LB broth(with Agar)에 Kanamycin을 얼마나 넣어야 할지 모르겠다?

 

아니면, transformation해서 나온 colony 중 하나를 따서  LB broth 3ml에 접종하려고 하는데 여기에 Kanamycin을 얼마나 넣어야 할지 모르겠다?

 

여튼.. km50이  Kanamycin 50mg/ml stock인거 같으니..보통 working 농도는 50ug/ul 농도로 많이 쓰므로, 1000X라 생각하고 배지 1ml당, 1ul 넣어주면 됩니다.

그리고, colony는 딱 1개 200ul tip으로 콕 찍어서 접종하면 됩니다.

 

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