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질문 ion pairing 사용 HPLC 용출 분석 질문합니다.
알wlgus88(과기인)  |  01.06 14:03

현재 복합제 용출분석법 셋팅 중 문제가 생겨 질문드립니다.

같은 컬럼을 사용하나 이동상을 달리하여 한 시퀀스 안에

A를 분석 한 뒤 No Vial로 B이동상을 이용해 안정화 한 다음 B를 분석하는 방법으로 실험을 진행중인데요

A는 저용량이며 이동상은 Buffer 50% 이고

B는 고용량이며 이동상은 Buffer 85% 입니다.

Buffer에는 heptane(ion pairing), NaCl이 L당 0.5g씩들어갑니다)

gradient를 사용하지 않고 각각의 이동상 한 라인으로 분석합니다.

함량은 이런식으로 진행했을 때 RT가 흔들리거나 피크 쉐입이 크게 변하는 문제는 없었기 때문에 용출분석도 함량과 같은 이동상과 조건으로 분석하려하는데요

(희석액조건은 두개의 물성을 따져서 30% ACN으로 고정,

Injection Volume은 둘다 10uL로 잡았으며 두개의 파장은 2mn정도밖에 차이나지 않습니다. 나머지 컬럼 종류,길이, 온도 등은 동일하게 가져갔습니다)

 

용출 분석법에서

저용량인 A는 Injection Volume이 50uL,

고용량인 B는 샘플을 희석하여 사용하기에 10uL로 분석하고 있습니다.

 

문제는 A를 분석하게 될때 RT가 같은 시간 간격으로 계속 밀려

ex) RT 7분->7.5분->8분

RT가 7분대이던 피크가 14,15분대까지 밀리는 것입니다.

이 시퀀스를 끊지않고 그대로 B의 이동상으로 안정화하여 B를 분석할 땐

RT가 소수점 두자리까지도 흔들리지 않고 고정이 되버립니다.

 

B의 부형제에 PEO를 사용하는데 이것이 A를 분석하는데에 영향을 미치는 건지 장비가 꽤 오래된 장비인데 장비문제일수도 있는건지요?

아니면 injection volume 이 커서 이온페이링으로 잡아주는것이 힘든부분인가요

안정화는 분석 전 두시간이상 충분히 진행후 분석했습니다.

 

#retention time
 
#ion pairing
 
#복합제 분석
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  01.06 14:26  

안정화는 어떤 방법으로 진행하나요?

알wlgus88  |  01.06 14:37  

각각의 이동상으로 두시간정도 정해진 유속으로 흘려줍니다.

이온페어링을 사용했을 때 붙었다가 떨어지는 게 어느정도 유지되어야 한다해서

넉넉하게 안정화 시간을 주고 있어요

대왕개구리SPEED  |  01.06 15:35  

컬럼에 문제가 없다면 이동상 % 차이는 문제가 없을 것 같습니다.

A 분석 -> washing 10CV -> B 이동상 15CV -> B  분석 -> washing 10CV ->

A이동상 15CV -> A 분석 순으로 하면 별 문제 없을 겁니다.

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