실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
point mutation primer 짤 때
레벨1 갓오브갓 (대학원생)
point mutation을 만들고 있습니다.
kit는 사용하지 않고 고전적인 방법으로 4개의 primer를 사용하여 mutation 줄 자리 앞쪽, 뒤쪽을 각각 pcr하여 뜬 다음 두 product를 섞고 overlap하는 식으로 진행하고 있는데요 (구글에서 찾은 모식도를 첨부합니다.)
질문 1. mutation primer를 짤 때 염기 3개가 다 다른 것으로 짜도 잘 붙나요?
Leu(CTG) -> Tyr(TAC) 로 mutation을 주고 싶을 때,
예를 들면 ACACAGGC CTG GATCTGC -> ACACAGGC TAC GATCTGC
이런식으로 짜도 잘 붙을까요?
보통 한 두개 염기만 다른 것들로만 해봐서 세 개가 다른건 어떤지 궁금합니다.
질문 2. codon optimize 된 염기 3개가 다른 primer
VS
codon optimize 안된 염기 2 개 다른 primer
두 가지 중 어느 것이 더 좋을까요?
예를 들어 Pro(CCT) 을 Gly으로 바꿀 때, gene에서 주로 쓰이는 Gly(GGA) 가 나은 것인지 아니면 Gly(GGT)가 나은 지 궁금합니다.
codon optimize 와 바뀌는 염기 개수 중 뭐가 더 우선할까요?
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