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레벨5
지나가는사람
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20.01.04 17:44
별개로 분석을 하시거나, Threshold 값을 원래 지정하셨던 값으로 지정하시고,
분석된 결과를 Relative 로 확인하시면 될 것 같습니다.
당연히 됩니다. plate-to-plate (run-to-run) normalization 으로 검색해 보세요.
요점은 plate가 오차는 ROX를 포함시켜서 plate나 시약셋업의 오차를 없애고, normalization control (normalization reference gene - actin, gapdh, ubq 등)을 매 플레이트마다 포함시켜서 dCt값을 표준화된 값으로 계산하게 하는 겁니다. control에 소요되는 샘플이 plate마다 반복해서 들어가기 때문에 많은 유전자를 볼 때 충분한 양의 cDNA를 확보하고, 또 소요량도 잘 계산하고 실험을 설계해야 합니다. 요약하면, control을 매 plate마다 같은 식으로 포함하고, 시약도 ROX dye가 들어 있는 버전으로 사용하시면 됩니다. 장비마다 분석툴에 이런 옵션이 다 들어 있기 때문에 계산은 기본값으로 하시면 될 겁니다.
같은 원리로, 기존 실험과의 통합도 dCt만 표준적으로 얻을 수 있으면 됩니다. 당연히 샘플(calibrator)이 공통으로 들어 있어야 하구요.