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a-tubulin과 GAPDH를 각각 loading하는 것이 아니라 시료 중에서 검출해서
lane 별 a-tubulin과 GAPDH 양을 동일하게 보정하면 됩니다.
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bhm660@naver.com
(비회원)
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19.12.24 13:01
평소대로 샘플 넣고 웨스턴하되 antibody로 GAPDH, tubulin을 detection하면 되는겁니다.
초보라고 하셔서 기본적인 내용을 위주로 설명을 드리겠습니다.
alpha tubulin과 GAPDH는 house keeping gene에 속하는 것들입니다. 소위 말해서 엥간하면 그 양 자체가 크게 변하지 않는다는 겁니다.(물론 특정 시그널에 의해서 얘들이 변화할 수도 있긴 하지만, 예외적인 경우이기에 고려하지 않고 생각을 해보겠습니다.)
그래서 tubulin과 GAPDH로 loading control을 한다는 말은,
(GAPDH 양=내가 로딩해준 양) 이라는 말이 되는거고, 각 sample간에 양적 차이를 GAPDH와 alpha-tubulin같은 house keeping gene의 발현량으로 간접적으로 비교해서 차이를 확인하기 위함입니다.