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 전체 > Microbiology > Bacteria
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질문 PCR후 전기영동 밴드 질문있습니다. (장출혈성대장균)
올챙이병원성미생물(과기인)  |  2019.12.17 14:37
첨부파일 파일첨부: 111.jpg (31 KB)
이미지 첨부파일

S : size maker

VT1,2 : Positive Control

N : Negative Control

Product : 검체

 

 

장출혈성 대장균 실험하다가

VT 1,2 밴드가

겔의 하나의 레인에서 두개의 띠를 나오게 하려고 하는데...

피드백좀 부탁드리겠습니다.
 


왼쪽부터 첫번째 사진이 제가 나타나게 하고 싶은 띠의 형태입니다.(두줄)

#두번째사진의 Positive Control은

VT1(5ul) + VT2(5ul)를 하나의 튜브에 넣고  PCR 후 전기영동
 

# 세번째사진의 Positive Control

VT1(5ul) , VT2(5ul) 각각 다른 튜브에 넣고 PCR 후 전기영동

 

 

두번째사진과 세번째사진은 같이 모든 공정을 동시에 똑같이 진행했습니다.

세번째 사진은 깔금한데 두번째사진은 끌림현상이 있는이유가 무엇일까요?
두번째 사진의 Positve를 VT1, VT2 두개가 같이 하나의 레인에 나오게 하고싶은데 어떻게 해야 할까요?

 

 

 

* 참고*

[장출혈성대장균  Primer가 펠렛형태로 들어가있는 올인원형 B사 키트를 사용했습니다.( PCT와 Product는 5ul씩 넣고 나머지는 D.W를 넣는 방식)]
 

 

 

 

#PCR
 
#장출혈성대장균
 
#밴드
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2019.12.17   

PCR product의 크기가 얼마인가요? 작아보이는데 200-300bp 정도 되어 보이네요.

이렇게 작은 DNA를 분리시키려면 agarose gel % 를 높이세요.

2-3% 로 gel을 만들면 큰 DNA 는 분리가 잘 안되도 500bp 이하는 크기별로 잘 분리됩니다.

세번째 사진은 아마도 잘 된 경우로 보이네요. 맨 아래 진한 밴드는 primer로 보이고요.

VT1에 비해서 VT2가 밴드가 조금 연합니다. VT2 primer를 두배 넣어보세요.

그리고 농도 높은 젤에 걸어보면 좀 더 이쁜 사진을 얻을 수 있을겁니다.

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