실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
웨스턴 블랏 밴드가 이상해요
레벨1 살려주세요1234 (대학원생)
안녕하세요
부족한 것이 많은 석사과정 학생입니다.
웨스턴을 하는데 밴드 모양이 자꾸 이상하게 나오네요ㅠㅠ
문제는
1. 밴드 모양 (일그러짐)
2. 밴드의 양끝은 진하고, 가운데로 갈 수록 연해지는 경향
제가 보려는 타겟이 위에 밴드고, 그 밑에는 같은 membrane, 같은 Lane의 b-actin입니다.
b-actin 밴드는 일자로 나왔으나, 타겟으로 보려는 밴드가 이상한 모양으로 일그러져있습니다.
Protein ladder도 보시면 살짝 일그러진게 관찰됩니다. 물론 전기영동까지는 가지런한 모양입니다.
밴드의 일그러짐은 아마도 transfer에서 문제가 생긴거라 추측하고 있습니다.
transfer 할 때 100V 1시간으로 진행하고 있으며, 내부에 ice 팩을 넣고 탱크 주변을 ice로 둘러싸고 온도를 내리고 있습니다. buffer를 냉장하고 있지는 않습니다.
이런 문제를 해결하려면 어떻게 해야할까요...
웨스턴 고수님들 도와주세요..
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