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 전체 > Molecular Biology-DNA > Transformation
조회 4975  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 transformation후 plasmid prep까지 시간을 좀더 단축 하는 방법이 있을까요 ?
꽃개구리TX(과기인)  | 2019.12.14 00:51

보통 Cloning 할때 ligation후 plasmid DNA를 얻기 위해서

 

첫째날 오후에 transformation of DH5a

둘째날 오후에 colony pick & 접종 시작, overnight culture

셋째날 오전에 mini prep kit 써서 뽑는데요...(총 3일 )

 

시간을 더 줄이는 방법이 있을까요..??

 

가령 첫째날에 transformation후 당일에 colony 얻어 접종까지 하고 집에 가기..

LB plate에 뭔가를 넣어 박테리아 colony를 더 빨리 생성시키거나, 온도를 37보다 더 높이거나...??  아니면 DH5a 보다 더 빨리 자라는 특별한 bacteria ??

 

아님 둘째날에 colony 접종후 당일 plasmid를 DNA sequencing할수 있을 만큼 빨리 뽑는 방법은 있을까요? 

DNA seq 의뢰할때 one reaction당 1.5ug (150ng/uL, 10uL)정도가 필요하더라구요. 

 

시간을 좀더 단축하고 싶은데 예전 방식 말고, 뭔가 새로운 방법이 있는지 궁금합니다....

#transformation
 
#plasmid purification
 
#cloning
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.12.14   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

실험 별 시작 시간에 따라 가능합니다.

1st day 아침일찍 TF, plate 40도 배양, 저녁늦게 colony 접종 및 broth 40도 배양

colony가 아주 작기 때문에 신경을 기울여 접종하면 가능합니다.

평소 배양 rpm보다 조금 더 올리고 배양 용기 대비 배지량도 평소 대비 50%~60%

로 해서 배양하면 빨리 자랍니다.

2nd day 오후 plasmid prep. 및 전기영동 확인, 제한효소 처리 및 확인

TF 직후의 plasmid copy는 최고 많은양을 균이 가집니다.

평소보다 균체량이 적어도 plasmid양은 최소 5배 이상 많이 나옵니다.

예전에 급해서 몇번 해본적이 있는데 충분히 가능합니다.

뒷다리ligation만 1년반째  |  2019.12.16   

이건 정말 급할때만 쓰긴했었는데

 

워싱이 관건이긴 합니다만...

 

저는 배지위에 콜로니 긁어서 그걸로 키트 라이시스버퍼로

 

prep 해서 쓴적 있습니다.

 

키트쓰시다 보면 적정 사이즈만 프렙 컬럼에 걸려서 생각보다

 

잘 나왔습니다. 그래도 시간이 충분하면 배양해서 쓰는게 좋습니다.

지나가다  |  2019.12.18    

첫째날 오후에 transformation of DH5a

둘째날 오전 일찍 colony pick & 접종, 저녁 늦게  mini prep kit 이용 plasmid 추출

 

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