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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 혈액에서 immunoprecipitation이 가능할까요?
개구리클레엉(대학원생)  | 2019.12.13 17:27

안녕하세요.

제가 혈장에서 미량의 단백질을 찾아내야하는데, 해당 단백질 form이 여러가지라 ELISA로는 구분이 안되서 SDS-PAGE를 통해 사이즈별로 나누어야 detect이 가능합니다.

혈장으로 여러차례 western 시도를 하였으나 detect이 잘 되지 않았는데요, 여러가지 생각을 해보다가 타겟으로 하려는 단백질이 무엇인지 알고 있으니 항체를 이용해 immunoprecipitation을 해볼 수 도 있겠다는 생각이 들었습니다.

 

현재 연구실 선배들중 immunoprecipitate 을 해보신 분이 아무도 안계시고, 선행 논문들도 전부 cell sample에서만 immunoprecipitate을 한 결과들이며 저도 경험이 전무한 상태인데요, 이론적으로 이 실험이 가능할 거 같긴한데 제가 간과하고 있는 부분들이 있는지 조언 부탁드립니다.

#immunoprecipitation
 
#westernblot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.12.13   

충분히 가능합니다.

western에서 band detection이 안된것이 조금 걸리네요..

serum에 있는 Ab를 전처리를 통해 어느정도 먼저 제거해주면 좋을 것 같습니다. 

개구리클레엉  |  2019.12.14   

detection 이 아예 안되진 않았습니다. 

다만 albumin 과 유사한 사이즈라(약 50kda) 알부민에 눌려서 분리가 잘 되어 보이지 않아서 밴드가 명확히 판단이 안가기에....ip를 생각해보았습니다ㅠ 

 

전처리라 하심은 어떠한 것을 의미하시는지 알려주실 수 있을까요?

대왕개구리SPEED  |  2019.12.14   

알부민은 66kDa인데 50K가 잘 안나오지는 않습니다.

gel %를 조금 내리면 서로간섭이 없는 분자량 차이입니다.

그리고 목적 단백질이 여러 form이라고 했는데 분자량은 50kDa하나만 target

인가요?

serum안의 Ab를 제거한 후에 target protein의 Ab로 captre하는 것이 좋을 듯

합니다.

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