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레벨3
ligation만 1년반째
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19.12.12 14:24
아마도 워싱 문제가 아닌것 같긴 하지만..
저있던 랩실에서는 2/3 정도 석션 후.
킴스와이프 몇장 두껍게 깔아놓고
그위에 플레이트를 뒤집어서 잠시 뒀습니다.
교수님 실험하실때 어깨너머로 배운거라
적절한 방법인지는 모르겠습니다.
Cell이 떨어지기 쉬운 Cell이거나,
다른 이유일 거 같긴한데
혹시모르니
DPBS(-)로 해보세요.
PBS(-)에 비해 Na2HPO4, KH2PO4 농도가 조금 낮습니다.
덜 떨어지더라구요.
그리고 랩에 따라 DPBS(-)를 그냥 PBS(-)로 부르는 랩들도 있어서
우선 사용하신 PBS(-) 조성을 확인해보시길.
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도라에몽
(비회원)
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19.12.12 19:28
하하..
본론으로 들어가면
cell이 석션할 때 떨어지는지
새로운 solution을 넣었을때 떨어지는지를
옆에 광학 현미경 있잖아요
그걸로 한번 확인해보세요(아 black well이라서 안되신다구요..?)
자, 석션할 때 떨어지는걸 조금 방지하는 방법은
실험실에 주사기 있잖아요 그거 주사기 앞쪽에 뾰족한 침 앞부분을 가위로 자르고 잘 소독한다음에 그걸로 석션해보세요 훨씬 덜 떨어집니다.
만약에 새로운 solution을 넣었을 때 떨어진다면! 그것은 어쩔 수 없습니다.
바닥에 콜라겐을 깔던지.. 그럴수도 있지만 안되구요
최대한 조심스럽게, well을 기울여서 조심스럽게 넣는 방법 밖에 없습니다.
윗분이 하신것 처럼 그냥 털어버리는 방법도 있지만요
cell이 떨어지는 것은, 너무 가득차게 자랐을 때도 떨어집니다. 바닥과 붙는 힘보단, 서로에게 의지하는 힘이 더 강하게 작용할 수도 있기 때문에 완전 꽉 채웠을 때 실험하시는 것은 지양하세용
넵.. 많은 변수가 있겠지만.. 그냥.. 저도 cell이 떨어지는 것으로 너무 고생했던터라.. 그냥 지나갈 수 없었네요!
저의 경우에는
1. suction기를 사용하지 않고 멀티 파이펫으로 조심스럽게 버퍼를 제거해 줍니다.
2. 워싱 버퍼를 넣을 때 파이펫 팁을 벽에 붙이고 버퍼가 벽을 타고 천천히 흘러 내려가도록 합니다.
일단 8개의 웰을 가지고 여러 방법들을 테스트를 해서 가장 좋은 방법을 선택해서, 셀이 떨어지는 문제를 해결한 다음 본 실험을 하시면 좋은 것 같습니다.
저는 1ml 시린지 니들을 아스피레이터에 연결해 바늘 한쪽끝(긴쪽)을 벽면으로 해서 석션을 합니다.
석션을 할때 문제라면 현미경을 보면 셀이 떨어져나간 자국이 보일것입니다. 썩션한쪽에 원형으로 구멍이 생겨 있을것입니다.
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레벨2
진저브래드트윅스
(대학원생)
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19.12.13 15:14
다들 답변 너무 감사합니다!
제가 지금 진행중인 실험이 현미경이 아니라 black well plate와 형광도 측정기 (multiplate reader)를 이용한 것이라 현미경으로 구멍을 확인하는 것은 어려울 것 같습니다 ㅠㅠ
조언해주신대로 suction기를 사용하지 않고 엎는 방법과, syringe needle을 사용하는 법 모두 시도해보겠습니다! 정말 감사합니다. 하시는 실험 다 잘되고 투고하시는 논문마다 한번에 accept되시길 바랍니다 ㅎㅎㅎ