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질문 HPLC 천연물 분리방법
올챙이나람(대학원생)  |  2019.12.11 09:56

분자유전학 쪽 전공 석사생인데요

현재 천연물을 TLC로 6 분획으로 분리,추출한 상태고 이것을 다시 HPLC로 분리 및 추출해서 셀실험에 사용하려는 합니다.

HPLC에 대해서 장비사용법만 배운 상태고 해당 물질의 분리 조건이나 이동상 비율 method 등 다 어떻게든 찾아서 피크 확인은 되었는데요... 이것을 추출하려고 컬럼 끝에 달린 얇은 호스로 피크 Rt 에 맞춰서 물질을 받아냈는데 이게 그 물질이 맞는지 재확인이 불가능한 상태에요 ㅠ
얻어낸 물질을 다시 hplc 걸어보면 피크가 이상하게 뜨고 ㅠㅜ

같이 나온 이동상 용매를 어떻게 날려야 할지도 잘 모르겠네요 ㅠ 용매 성분은 물이랑 아세토나이트릴 일정비율 섞인거에요... 추출물 자체에 메탄올 성분 있구요.

보통 hplc 해서 물질 얻어낼때 어떻게 하나요..?

prep HPLC를 꼭 써야하나요?

#HPLC
 
#분리
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.12.11   

HPLC에서 물질을 분리할 때는 semi-prep 또는 prep HPLC 장비를 사용합니다.

질문의 방법을 사용해도 소량은 가능하지만 할때마다 재현서잉 나올지는

의문입니다.

현재 정해진 target peak가 있는건가요 아니면 전체 fraction에서 원하는 peak를

찾아야 하는건가요?

분리한 peak는 HPLC 또는 TLC로 다시확인해도 잘 나와야 합니다.

그리고 용매 제거는 시료 양, 용매에 따라 다르지만 질소 농축, 진공농축,

가열농축 등이 사용가능합니다.

개구리당구왕빠킹  |  2019.12.11   

분취용 LC를 사용하신 것이 아니라면 원하는 피크를 정확하게 받아내기 어렵습니다. 디텍터와 컬랙션파트의 거리만큼 오차가 발생합니다.

올챙이ligation만 1년반째  |  2019.12.11   

저도 동일한 방식으로 프랙션을 따보기도 하고 별 삽질을 다해봤지만...나중에 fraction collector 연결하고 전부다 부질없음을 깨달았죠...피크에 찍히는 시간과 연결되어있는 라인사이의 간극이 분명히 발생합니다. 물론 피크와 피크 사이가 넓다면 몰라도 천연물에서 특정 조건에서 안찍히는 물질이 더 많을겁니다. 또 피크에 겹치는 물질도 많을꺼고 원하는 RT에서 받았어 라고 해도 정확한 물질이 아닐 경우가 훨씬 많습니다. 원래 분석했던 샘플에서 처럼 피크가 이쁘게 나오지도 않구여..차라리.. TLC판 긁어서 하시는게 나을지도 몰라요...

대왕개구리SPEED  |  2019.12.11   

실험자의 실험 방법이 잘못된 겁니다.

prep. 장비를 사용하면 detector와 fraction collector 사이의 line은 계산이 되어

있습니다.

이 line도 장비에 포함되어 있는 line kit를 사용해야 하며 임의로 line길이나 두께를

바꿔서도 안됩니다.

prep.장비가 아닌 일반 장비를 사용하여 line 끝에 그냥 collector를 연결하면

당연히 program에서는 detector와 collector 사이의 길이는 계산이 되지 않아

오차가 발생합니다. 

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