실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
PCR product를 Enzyme reaction했을 때 band가 자꾸 사라져서 질문 드립니다ㅠ
레벨2 pico (일반인)
안녕하세요
cloning을 진행 중에 문제가 발생하여 질문 드립니다..
왼쪽 gel에서
마커를 제외하고 3번째 lane이 PCR product를 band isolation한 것이고
4번째 lane이 Enzyme reaction 한 PCR product입니다
Enzyme은 BamH1과 Hind3이고 reaction 시간은 3시간 30분 정도 진행하였습니다.
그런데 enzyme reaction 후 PCR product가 계속 4번째 lane 처럼 나옵니다 ㅠㅠ
4번 lane에 희미하게 형성 된 band가 있기는 한데.. size가 옆의
band isolation한 것과 동일하게 나와야 맞는데 더 위쪽에 퍼지게 생겨서
이게 맞는지 아님 다 날아간건지 도무지 모르겠어서 질문드립니다 ㅠㅠ
NEB cutter로 확인했을 때 PCR product sequence에 제가 사용한 enzyme site가 있지는 않았습니다
혹시 저처럼 PCR product가 enzyme reaction 후 계속 사라지거나 사진처럼
위쪽으로 퍼져서 밴드가 나오는 경우가 있나요..?? ㅠㅠ
실험 고수님들의 의견 부탁드립니다
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