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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 SDS PAGE gel 을 내릴때
알ss2k0335(대학생)  | 2019.12.07 13:59

여러분들 안녕하세요?

저는 최근에 western blot을 하고 있는 학생입니다.

SDS-PAGE gel에 loading을 하다가 말도 안되는 생각이긴 하지만

혹시나 저랑 비슷한 생각을 하신 분들이 있는지 궁금하여 질문을 하게 되었습니다.

sample을 loading하여 SDS-PAGE gel을 stacking gel까지만 내리고 다시 sample을 또 loading할 수 있는지 궁금하네요.

stacking이라는게 쌓는다는 의미로 해석이 된다면 sample을 여러번 loading하여 쌓을 수 있지 않을까 생각이 듭니다.

정말 어이없고 말도 안되는 질문을 해 죄송합니다만

혹시나 시도해보신 분들이 있는가 싶어 질문 올립니다.

여러분들의 소중한 시간을 소비하게 해드려 죄송합니다ㅠㅠ

#SDS-PAGE
 
#western blot
 
#stacking gel
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.12.07   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

결론부터 얘기하면 예상처럼 되지 않습니다.

이유는 stacking gel의 역할은 질문에서도 나와있듯이 losding한 시료를

일직선으로 만들어 running gel에 모든 시료의 출발선을 동일하게 만드는 역할을

합니다.

그러나 농축의 역할이 loading된 시료 별로 일어나고 농축되는 과정에서도 시료는

머물러 있지 않고 계속 아래로 내려갑니다.

즉, 1차 loading시료의 농축 후 2차 loading을 하면 1차 시료가 내려가면서 2차

시료도 내려가기 때문에 BPB line이 2개 생깁니다.

각 BPB line에 시료가 있기 때문에 band가 중첩되어 나타나 분석이 불가능합니다.

또한 1차 loading시료가 내려가면 stacking gel의 buffer가 전기영동 tank buffer로

바뀝니다.

따라서 농축 현상이 2차 부터는 거의 일어나지 않습니다.

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