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X-gal은 무색입니다.
IPTG에 의해서 b-galactosidase가 발현되면 b-galactosidase가 X-gal을 분해해서 파란 product를 만듭니다.
그래서 b-galactosidase를 만드는 colony는 파란색을 띱니다.
이런 실험을 할때 사용하는 대장균 벡터(예를 들면 pBluescript)에는 b-galactosidase의 반토막이 들어있고 대장균 염색체에 나머지 반토막이 들어 있습니다.
IPTG를 처리하면 벡터에 있던 b-galactosidase 반토막이 발현되서 염색체가 만든 나머지 반토막과 결합해서 active b-galactosidase가 만들어집니다.
이때 이 효소가 X-gal을 분해해서 파란 product를 만듭니다.
그런데 이 벡터의 cloning site는 이 b-galactosidase 유전자 N-terminal 부위에 있어서 어떤 DNA 조각을 클로닝하면 유전자의 orf 가 깨져서 active b-galactosidase가 안만들어지고 X-gal 분해가 안돼서 그냥 흰색 colony를 만듭니다.
그래서 X-gal/IPTG 배지에서 흰 colony는 재조합클론, blue colony는 꽝 인거지요.
x-gal은 흰색이 아니라 투명한 색입니다.
- 재조합된 플라스미드를 갖고 있는 대장균과 살아남지 못한 대장균 둘 다 베타
갈락토시데이즈를 못 만들어서 x-gal을 분해하지 못하는데 왜 차이가 생기는
건가요?
: 무슨 차이가 있다는 것인지.. 자란 대장균과 자라지 못한 대장균은 비교
대상이 아니고 insert가 들어간 vector와 들어가지 않은 vector는 w/b selection이
가능합니다.