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 전체 > Chemical biology > Analysis
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질문 X-gal이 흰색인 이유가 궁금합니다
알아이고마야(대학생)  |  2019.12.02 02:46
안녕하세요?
오랜 시간 고민해도 풀리지 않아서 기본적인 것임에도 불구하고 여쭤보겠습니다.
바쁘실텐데 시간내어 읽어주셔서 정말 감사합니다.



eGFP 과발현 실험 과정 중 blue-white screening 기법을 통해 single colony를 얻는 실험을 했습니다.
이 과정에서 우리가 원하는 재조합된 콜로니는 흰색 콜로니라는 것을 이해했습니다.



재조합된 플라스미드를 갖고 있는 대장균과 살아남지 못한 대장균 둘 다 베타 갈락토시데이즈를 못 만들어서 x-gal을 분해하지 못하는데 왜 차이가 생기는 건가요?

원래 x-gal의 색이 흰색이라고 배웠는데, 그러면 배지 전체가 흰색이여야 하는 거 아닌가요...????



감사합니다.
#X-gal
 
#Bluewhitescreening
 
#Transformation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2019.12.02   

X-gal은 무색입니다.

IPTG에 의해서 b-galactosidase가 발현되면 b-galactosidase가 X-gal을 분해해서 파란 product를 만듭니다.

그래서 b-galactosidase를 만드는 colony는 파란색을 띱니다.

이런 실험을 할때 사용하는 대장균 벡터(예를 들면 pBluescript)에는 b-galactosidase의 반토막이 들어있고 대장균 염색체에 나머지 반토막이 들어 있습니다.

IPTG를 처리하면 벡터에 있던 b-galactosidase 반토막이 발현되서 염색체가 만든 나머지 반토막과 결합해서 active b-galactosidase가 만들어집니다.

이때 이 효소가 X-gal을 분해해서 파란 product를 만듭니다.

그런데 이 벡터의 cloning site는 이 b-galactosidase 유전자 N-terminal 부위에 있어서 어떤 DNA 조각을  클로닝하면 유전자의 orf 가 깨져서 active b-galactosidase가 안만들어지고 X-gal 분해가 안돼서 그냥  흰색 colony를 만듭니다.

 

그래서 X-gal/IPTG 배지에서 흰 colony는 재조합클론, blue colony는 인거지요.

대왕개구리SPEED  |  2019.12.02   

x-gal은 흰색이 아니라 투명한 색입니다.

- 재조합된 플라스미드를 갖고 있는 대장균과 살아남지 못한 대장균 둘 다 베타

갈락토시데이즈를 못 만들어서 x-gal을 분해하지 못하는데 왜 차이가 생기는

건가요? 

: 무슨 차이가 있다는 것인지.. 자란 대장균과 자라지 못한 대장균은 비교

대상이 아니고 insert가 들어간 vector와 들어가지 않은 vector는 w/b selection이

가능합니다.

 

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