농도도 중요하지만 실제 전기영동을 해서 plasmid pattern을 확인하는 것도 중요

합니다.

왼쪽 3개는 다시 prep.해 보는것이 좋을 듯하고 오른쪽 3개는 제한효소로 자라서

원하는 plasmid인지 확인해 보세요.

우선 plasmid 정제를 다시 해야 합니다.

왼쪽 3개는 plasmid 없는것 같구요. 오른쪽 3개는 plasmid가 뽑히기는 했으나 역시 다시 뽑아야 합니다.

아래쪽 밴드 두개는 plasmid가 맞으나 맨 위 두꺼운 밴드는 gDNA 입니다.

마커는 아마도 Lambda/HindIII 인것 같은데 맨 위 밴드가 24kb이며 그보다 더 위에 밴드가 있는것은 gDNA라는 의미입니다.

먼저 건 세 개의 시료는 plasmid가 없습니다.

다음에 plasmid를 뽑을때는 Sol2 처리할때 최대한 부드럽게 섞으세요. 그래야 gDNA가 최소한으로 오염되며, Sol2 단계에서 tube를 막 험하게 섞으면 섞을수록 gDNA 오염이 심해집니다.

Sol3 단계도 마찬가지로 부드럽게 섞어야 합니다.

답변해주셔서 감사드립니다~~~~!!

한 가지 더 질문을 해도 될까요~?

일단 답변해주신 내용대로 HIND III 마커를 이용한게 맞습니다.

저는 plasmid DNA extraction kit로 뽑았으니 중앙에 나온 3개의 밴드가 모두

플라스 미드라고 생각했었는데 gDNA라니.. 제가 프렙 도중에 튜브 핸들링을

잘 못해서 gDNA에 오염이 된 것이라고 생각하면 될까요?

그리고 마커 윗부분에 뜬 밴드는 gDNA라고 하셨는데 그 이유가.. 뭔지

잘 모르겠습니다.  답변 부탁드려요. 감사합니다.^^

plasmid prep. kit에서 gDNA가 나오는 경우는 거의 없습니다.

하지만 위치를 봐서 제일 위의 band는 gDNA 위치와 비슷합니다.

그러나 band양이 너무 많기 때문에 gDNA가 아니라고도 보입니다.

- 그리고 마커 윗부분에 뜬 밴드는 gDNA라고 하셨는데 그 이유가..

: gDNA를 분리해서 전기영동 하면 비슷한 위치에 나옵니다.

따라서 plasmid DNA는 무조건 분리 후 제한효소로 잘라서 확인을 해야 합니다.

왼쪽3개 lane이 plasmid가 확실히 있는 균이라면 gDNA가 분해된것일 수도

있기 때문에 kit에 문제가 있을 가능성도 있습니다.

kit의 용액을 정확히 처리해서 다시 분리해 보세요.

감사합니다.

말씀해주신대로 다시 진행해보려고 합니다. ^^

감기조심하세요!