실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
RT-PCR을 진행, PCR 특이적 밴드가 뜨지 않습니다.
레벨1 구미 (대학생)
RT- PCR을 진행하고 있는 학부생입니다.
RNA 바이러스로부터 RNA를 추출하여 cDNA 그리고 PCR까지과정을 거쳐 전기영동을 통해 샘플을 확인해봤는데 특이적밴드인 444bp가 보이지 않고 맨 아래 밴드만이 보이는 것을 확인할 수 있었습니다. 월초까지만해도 잘만 뜨던 밴드가 갑자기 뜨지 않으니 답답하기만 하네요 많은 선배님들의 답변 부탁드리겠습니다.(ladder는 100bp를 사용했습니다)
조건
1. T-25 flask에서 바이러스에 감염된 세포를 거두어 trizol을 이용하여 RNA 추출 -> 펠렛 확인
2. enzynomics사 cDNA 합성 키트를 이용해서 합성진행
3. cDNA 농도 및 용량 측정 후 총 cDNA template의 양을
200ng, 500ng, 1000ng 나누어 takara ex taq을 이용해서 PCR을 진행
4. 사진은 농도 및 용량 확인 후 전기영동을 돌린 결과물 입니다.
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