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JC-1 시약 사용 해 보신 선생님들께..
레벨5 eldggp1 (대학생)
선생님들 안녕하세요. 날씨가 추우니 감기 조심하시길 바라겠습니다
JC-1 시약은 미토콘드리아의 막전위를 측정하는 시약으로 알고 있습니다. 저희 실험실에서 이번에 KIT을 사용해 세포에서 미토콘드리아를 분리한 후에 microplate reader로 JC-1을 이용해 막전위를 측정 할 계획에 있는데요
시약 DATASHEET를 확인 해 보니 세포에 직접 처리하여서 분석을 하더군요. 저희는 미토콘드리아에 직접 jc-1을 사용해 측정을 하고 싶은데 혹시 경험 있으신 선생님들 조언 부탁드리겠습니다.
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MT를 분리하고 BCA assay로 농도를 측정하여 같은 농도의 MT를 96well plate에 로딩하고 jc-1을 농도에 맞게 넣어주었습니다.
10번 정도 동일한 실험 결과는 참담하게도 동일 세포에서 동일 농도의 mt를 로딩했음에도 값이 매우 뒤죽박죽이라 어떻게 재현성을 맞춰야 할지 모르겠습니다...
RED 값이 언제는 10000 정도 였다가 또 다른 실험에서는 20000정도, 다른 실험에서는 25000정도 이런식으로 너무 차이가 납니다.
생각되는 오차의 원인은 MT의 농도 측정을 했다 하더라도 그것이 온전히 100% MT의 농도가 아니라 다른 protein이 있어 MT의 양이 일정하지 않다. 이 정도입니다..
조언 부탁드리겠습니다
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