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질문 DEAE 카트리지 이용한 시험법
알658765(일반인)  | 2019.11.21 13:36

TOYOPERL_DEAE-650M 을 이용하여 컬럼을 만들어 사용중에 있는데, 정량값의 재현성이 나오지않습니다.

떨어지는 유속을 최대한 동일하게 하여서 진행하였는데도

함량값이 왔다갔다 합니다.

레진을 충전할때나 검체를 통과시킬때 주의사항이 있을까요?ㅠㅠ

그리고 시판되는 SPE 카트리지가 있을까요?

SPE WAX가 동일한 건가요??ㅠㅠ

#DEAE
 
#SPE
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2019.11.21   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

어떤 목적으로 TOYOPERL_DEAE-650M을 사용하나요?

그리고 SPE는 종류가 많기 때문에 그냥 시판되는 SPE를 물으면 안되고

TOYOPERL_DEAE-650M이 WAX입니다.

알658765  |  2019.11.21   

히알루론산을 다른 물질들과 분리하여

히알루론산만 추출하려고 합니다.

그래서 나오긴하는데 이론정량값이 100%라면

98%, 90% 를 왔다갔다 합니다ㅠㅠ

레진을 충진할 때 공백이없어야 하나요?

제가 제조한 컬럼은 공백이 보이기도 합니다ㅠㅠ

대왕개구리SPEED  |  2019.11.21   

레진을 충진한 후 기포나 공극이 생기면 안좋습니다.

WAX를 사용하는 방법은 2가지가 있는데 WAX에 붙였다가 분리하는 방법 및

WAX를 그냥 통과시켜 분리하는 방법을 사용합니다.

질문자는 어떤 방법을 사용하는지 모르겠고 수율이 차이가 나는 것은 레진의

충진문제는 아니고 실험 조건상의 문제일 겁니다. 

알658765  |  2019.11.21   

시험조건이라고 하시면, 어떤 조건을 말씀하시나요?ㅠㅠ

전처리에서 사용하는 용매 등을 말씀하시나요?

처음엔 메탄올로 활성화 후 pH 7.0 sodium phosphate를 흘려주고

검액을 주입 후 pH 7.0 Sodium sulfate로 추출하여 사용중입니다.ㅠㅠ

레진에 흡착시켰다가 sodium sulfate에 추출되도록 하고있습니다.

제가 공극에 차이도 있고, 저는 흘려주는 용매마다 레진끝까지 전부 탈탈 털어내고 다시 다음 buffer를 넣어줬는데 혹시 그런 것에서도 문제가있을까요?

검색을 해도 주의사항등은 별로 나오지않아서...어디가 잘못된건지 잘 모르겠습니다ㅠㅠ

대왕개구리SPEED  |  2019.11.21   

1. 처음엔 메탄올로 활성화 후

: DEAE는 MeOH로 functional group의 activation이 안될겁니다.

2. 시료의 용매 조성은 어떤가요?

3. pH 7.0 sodium phosphate를 흘려주고 검액을 주입 후 pH 7.0 Sodium sulfate로

추출하여 사용중입니다.ㅠㅠ

:  Sodium sulfate 농도는 어느 범위에서 사용하나요?

DEAE는 Cl- type으로  Sodium sulfate는 재현성이 낮을수 있기 때문에 NaCl을

사용하세요.

4. 제가 공극에 차이도 있고..

: 공극은 없는 것이 좋지만 있다고 해서 수율에 큰 문제가 생기지 않습니다.

5. 저는 흘려주는 용매마다 레진끝까지 전부 탈탈 털어내고..

: 이방법도 가능하지만 레진 윗부분까지 내린 후 다음 buffer를 넣어주는 것이

좋습니다.

resin을 실험 중에 공기에 dry시키는 것은 좋지 않습니다.

알658765  |  2019.11.21   

처음에 메탄올 흘린 후에 10mM sodium phosphate 를 흘려줍니다.

그럼 활성은 10mM sodium phosphate부터라고 보면 될까요?

그리고 그 후 검액을 흘려줍니다. 검액은 20mM sodium phophate에 녹여져 있구요..

그리고  resin을 공기중에 노출 시키는게 좋지 않다고 하셨는데

저는 마지막에 sodium sulfate에 해당하는 양만큼만 추출하여 얻고 싶은데 sulfate전까지는 buffer들로 밀어주고 얻고자 하는 것 직전에만 다 털어내고 받으면 될까요?ㅠㅠ 

대왕개구리SPEED  |  2019.11.21   

1 처음에 메탄올 흘린 후에 10mM sodium phosphate 를 흘려줍니다.

: resin이 100% 활성화가 안됩니다.

2. 그리고 그 후 검액을 흘려줍니다. 검액은 20mM sodium phophate에 녹여져

있구요..

: resin buffer와 시료의 buffer는 동일한 buffer를 사용해야 합니다.

3. 저는 마지막에 sodium sulfate에 해당하는 양만큼만 추출하여 얻고 싶은데

sulfate전까지는 buffer들로 밀어주고 얻고자 하는 것 직전에만 다 털어내고

받으면 될까요?ㅠㅠ 

: IEX를 하면 들어간 buffer양 만큼 시료를 받을 수 없습니다.

부피가 늘어나기 때문에 나중에 농축을 해서 부피를 조절합니다.

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