[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보  |  e브릭몰e브릭몰 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
랩박스 - 형광 이미징의 모든 것
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2
과학으로 본 코로나19 (COVID-19)
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 전체 > Immunology > Immunocytochemistry
조회 1931  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 ICC진행중인데 컨트롤에서 계속 형광이 나타납니다.
뒷다리시은(대학원생)  |  2019.11.18 12:49

안녕하세요 브릭에서 많은걸 질문하고 얻어가고 있는 석사1년차입니다.

 

최근 단백질 처리후 투과를 보기위해 ICC를 진행하고있습니다. 

진행하는 방법은

1. cell Fixation

2. 0.25% Triton X-100 (in PBS)으로 30분

3. PBS or PBS-T로 5회 washing

4. 3% BSA sol. (in PBS-T)로 blocking 1시간

5. 3과 동일하게 washing

6. 1% BSA sol. (in PBS-T)에 1st Ab (250:1) 첨가. 4℃에서 O/N

7. 다음날 3과 동일하게 washing

8. 1% BSA sol. (in PBS-T)에 2nd Ab(Alexa488)(500:1) 첨가. 암실, RT에서 반응 1시간

9. 3과 동일하게 washing

10. DAPI (in PBS) 1000:1(혹은 2000:1까지 희석가능) 이용해 암실에서 1분(넘기지 않게) 반응

11. washing 3회

 

진행하고 있습니다. 제가 사용하는 단백질은 T7tag와  6x histidine이 달려있어서 먼저 t7으로 진행했는데 컨트롤에서도 거의 유사하게 형광이 잡혀서 이번에는 histidine으로도 진행해봤으나 역시 컨트롤에서도 나와 매우 곤란한 상황입니다. 단백질에 대한 항체는 아직 보유하고 있지않은데 원래 이게 일반적인 세포에서도 나오는거라 구매를해서 진행해도 같은결과가 나올까 주문을 고민하고 있습니다. cell은 HDF로 진행하고 있습니다...

혹시 뭐가 잘못된걸까요...?확인은 형광형미경으로 진행하엿습니다..

# ICC
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
뒷다리hcp074  |  2019.11.18   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

positive control도 필요해 보입니다.

답변하기
할인행사 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN] Spark cyto 하나의 장비로 한 번에!! Multi-mode microplate rea.. (6.20까지)
케이비티 케이비티
[KBT] Rotator, Thermo Mixer, Ultrasonicator, Stirrer 등 기본 실험.. (6.30까지)
셀레믹스 셀레믹스
BTSeq Contiguous Sequencing 서비스 런칭 이벤트 - 무료 분석서비스(1만 마일리지) 제.. (6.30까지)
에펜도르프코리아 에펜도르프코리아
[에펜도르프코리아] Eppendorf 2020 상반기 프로모션 안내 : 실험실 필수품 피펫,원심분리기,PCR.. (8.8까지)
외부제휴사 광고 AD
e브릭몰
2/6  좌우
101,10060,700
242,400145,500
339,400322,500
131,90079,200
468,000421,200
739,000702,100
493,000443,700
870,000
109,00098,100
370,000333,000
50,00030,000
262,500157,500
92,30087,700
787,400472,500
23,00019,600
79,50075,600
482,000433,800
6,0005,100
52,60050,000
17,00014,500
924,000
49,00041,700
125,500119,300
482,000433,800
최근등록   더보기 >
X-gal과 빛   05.30
plasmid region   05.30
QIAGEN plasmid midiprep   05.30
M mM uM   05.30
Transformation 결과로 Blue/White selection을 했는데 결과에 대...   05.30
혹시 2 3-dimethylmaleic anhydride사용할때 후드에서 해야되나요?   05.29
overlap pcr primer 질문드립니다.   05.29
구리 이온 향균 효과에 대해   05.29
Cutibacterium acnes 살균법요...   05.29
여러분들은 fibroblast cell line 어떤거 사용하시나요?   05.29
밀테니바이오텍 코리아
ZEUS
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
에펜도르프코리아