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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 uncut vector와 cut vecter 차이 관련해서 질문 드립니다ㅠ
알pico(일반인)  |  11.17 14:02
첨부파일 파일첨부: 19.11.14 EcoR1, Xho1 pcDNA3.1(+) efficiency check.jpg (92 KB)
이미지 첨부파일

안녕하세요

랩실에서 실험을 배우고 있는 학부생입니다.

다름아니라 제가 cloning을  진행중인데요

ligation을 위해 vector를 enzyme reacion해서 agarose gel에 전기영동을 했는데

이론상으로 uncut vector가 더 아래로, cut vector가 위로 나와야 한다고 알고있는데

계속 uncut vector가 사진처럼 훨씬 위쪽에 나와서 다음 실험을 진행하지 못하고 있습니다 ㅠ

처음에 사용했던 uncut vector가 혹시 보관 과정에서 잘렸나싶어서 새로 mini-prep한 DNA로 해봤는데도 계속 저렇게 나오네요 ㅠㅠ

찾아보니 2% gel에서 해야 uncut vector가 아래로 내려간다는 글을 봐서 그렇게 내렸는데도 여전히 uncut vector가 위에 나오네요 ㅠㅠ 물론 1%도 마찬가지였습니다 ㅠㅠ

vector 종류는 pcDNA3.1(+)입니다!

순서대로 1kb M, uncut, EcoR1 onecut, Xho1 onecut, Eco/Xho two cut 입니다

왜 이런결과가 나오는지 알려주시면 정말 감사하겠습니다 ㅠㅠㅠ

#cloning
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채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 찾아보니 2% gel에서 해야 uncut vector가 아래로 내려간다는 글을 봐서..

: 이론에 맞지 않는 말이고 그렇지는 않습니다.

vector는 자르지 않은 pattern 보다 잘랐을 때 분자량이 정확히 나오는 것이

중요합니다.

마커 위쪽이 선명히 나오지 않았는데 자른 분자량은 정확히 나왔나요?

일반적으로 자르지 않은 vector는 아래에서 부터 CCC form, linear form,

nicked form 순으로 나오지만 간혹 2분자가 합쳐진 form이 나오기도 합니다.

따라서 현재 vector가 원하는 vector인지 정확히 확인해 보세요.

 

대왕개구리SPEED  |  11.17 15:37  

안녕하세요! 주말인데도 빠른 답변 감사드립니다 :D
1%로 내렸을 때 위쪽 마커는 잘 보였고 cut vector의 size는 아는 것과 맞게 잘 나왔습니다. (1%로 내린 사진을 지금 갖고 있지않아 올리지 못했어요ㅠㅠ)
다만 제가 이론으로 알고있던것과 uncut vector의 위치가 달라서 그 부분때문에 계속 고민중이었습니다 ㅠ form이 겹쳐서 나오는 경우도 있군요.. cutting된 vector의 size는 맞게 나왔으니 다음 실험 진행해보도록 하겠습니다!! 감사합니다!!

알pico  |  11.17 16:28  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
저랑 똑같이 나오시네요 ㄸ.. 저는 그냥 바로 클로닝 진행 했는데 타겟 잘 얻었습니다..
알플라스미도  |  11.18 04:44  
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