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질문 96-well에 loading시 bubble이 안 생기게 하는 팁이 있나요
알VanillaLatte(대학원생)  |  11.16 18:33

* 질문요약하면,

1) 96well plate에 생긴 bubble을 제거하는방법
2) loading 시 거품이 생기지 않게하는 팁

이 궁금합니다


안녕하세요

툭 터놓고 조언구할 직속선배, 사수도 없고, 랩에 속한 연구교수님이 계시긴 하지만 어렵기도 하고... 이런 사소한거 여쭤보면 별로 안좋아하셔서.... 
이렇게 경험에서 우러나오는 사소한 팁을 얻기 힘들어 여기 계신 선생님들께 질문드립니다.

 

96-well 을 포함해 pipette으로 loading 시 거품(bubble)이 안 생기게 하는 팁이 있나요?
이 질문은 real-time PCR 하며 생긴 고민인데, 이 외 다른실험에도 거품이 안생기게 loading하고 싶습니다.

 

제가 해본 방법과 결과로는

1. sealing 후 살살 탁탁 내려치기 → 표면에 생긴 큰 bubble은 안 없어짐
2. sealing 후 손가락으로 꿀밤때리듯 치기 → 큰 bubble들이 쪼개지긴 한데 없어지진 않을때도 있음
3. sealing 후 뒤집어서 내려치기→ bubble이 표면에 생기길래 뒤집어서 쳐봤는데.. sample이 넘쳐 버린것같아서 그뒤로 안쓰는 방법ㅠㅠ
4. centrifuge (500g, 3분) → 표면의 큰 bubble은 안 없어질때도 있음

입니다.
위 방법으로 어느정도 없어지기도 하지만, 그래도 더 완벽히 없애고 싶은데 잘 안되네요..

 

찾아보니

살살살 바닥에 치면된다, 꿀밤치듯 때려라, 헤어드라이어로 데워라(researchgate 글), 달군 바늘로 찔러라, centrifuge해라 가 있던데

이 밖에도 다른 방법이 있을까요?

 

아님 제 pipetting에 문제가 있는걸까요?

저는 tube 벽에대고 천천히 eject 한다고 하는데, 마지막에 2단계까지 눌러서 다 내보내려 하다보니 거품이 생기는것 같습니다. 하지만 또 어떨때는 매끈하게 흘러 쌓이기도 하구요. 어떤 차이인지 잘 모르겠습니다..

 

그래서 질문을 요약하면,

1. 96-well 에 생긴 bubble을 제거하는 방법이
바닥에 탁탁 내려치기, 손가락으로 꿀밤치듯 치기, centrifuge 이외에도 다른 팁이 있나요?
(헤어드라이어랑 달군 바늘 방법은 저희 랩에서 하기 어려울것같아서 제외하겠습니다..)

2. 선생님들께서는 loading할 때 거품이 생기지 않게하는 특별한 팁이 있나요?

 

#bubble
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
PBS wash같이 정량이 떨어져도 되는경우에 피펫 빨아들일때 1step 말구 1.5step정도로 빨아들이시고 1step까지만 뱉으시면 이론상으로는 맞춰놓은양만 나오고 나머지 0.5step 어치는 남아있다고 볼 수 있긴 한데 너무 편법방법이라..
올챙이RBR  |  11.17 19:03  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

저는 다음과 같이 진행합니다.

 

먼저 원스텝으로 media를 96 wells에 넣고, 그리고 media 에 팁을 넣지 않고 조금 위의 벽면에 올려 2스텝으로 잔량을 넣습니다. 천천히요~

 

그럼 버블이 생기지 않습니다.

개구리지나가는사람  |  11.18 09:09  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

그리고, plate에 생긴 버블은 culture 중에 터져 없어집니다.

 

만약, ELISA 등과 같은 실험시 버블이 생긴다면, 깨끗한 주사바늘로 터칩니다.

 

최대한 작은 size로 진행합니다.

개구리지나가는사람  |  11.18 09:10  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

real-time PCR인 경우라면 centrifuge를 좀 더 세게 하면 버블 사라집니다.

3000 rpm 5 min 정도를 시도해 보세요.

뒷다리hcp074  |  11.18 14:17  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

안녕하세요..지나가다가 제목을 보고 들렸습니다.

제가 아는 팁을 하나 알려드리겠습니다.

위에 많은 정보들을 공유해주셨는데요..다들 좋은 방법들인데..제가 드리는 방법은 조금 다릅니다. .

실험실에 70%에탄올 분문기 다 가지고 계시죠...

분무기 헤드를 열어서 안쪽에 튜브를 제거합니다. 제거하고 헤드를 다시 장착합니다.  가능하면 에탄올은 병의 절반이하만 채워둡니다.

일정 시간이 지나만 분무기병 내부에 에탄올입자들이 채워진 기체가 모여있게 됩니다.

( 제가 용어표현이 부족해서.... 이해해주세요..)

그상태로 96well 에 생긴 버블들을 향해서 일정거리를 두고 분주해주면 에타올입자들이 나가면서 버블들을 깨트리고 에탄올입자들은 날아가 버립니다.

먼저 테스트해보세요..

도움이 되셨길 바랍니다.

 

수고하세요..

 

bubble제거팁  |  11.20 12:08   

바람을 불어줍니다. 그럼 큰 버블이 사라져요. 

new app  |  11.21 12:43   

tip 거꾸로 하여 살짝 넣었다 빼주면 됩니다.

답변  |  11.21 15:29   

리버스파이펫팅하시면됩니다.

 

보통 한번눌러 흡입하고, 두번 눌러 완전히 용액을 모두 빼내실겁니다.

두번모두 눌러 흡입한 뒤, 한번만 눌러 용액을 빼내는 방법입니다.

그럴 경우 버블이 거의 들어가지 않습니다. 

마지막 완전히 빼낼때 버블이 들어가는 경우가 많은데, 그 행위를 하지 않기때문에 버블이 거의 들어가지 않습니다. 

졸업생  |  11.21 17:40   
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