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질문 96-well에 loading시 bubble이 안 생기게 하는 팁이 있나요
알VanillaLatte(대학원생)  | 2019.11.16 18:33

* 질문요약하면,

1) 96well plate에 생긴 bubble을 제거하는방법
2) loading 시 거품이 생기지 않게하는 팁

이 궁금합니다


안녕하세요

툭 터놓고 조언구할 직속선배, 사수도 없고, 랩에 속한 연구교수님이 계시긴 하지만 어렵기도 하고... 이런 사소한거 여쭤보면 별로 안좋아하셔서.... 
이렇게 경험에서 우러나오는 사소한 팁을 얻기 힘들어 여기 계신 선생님들께 질문드립니다.

 

96-well 을 포함해 pipette으로 loading 시 거품(bubble)이 안 생기게 하는 팁이 있나요?
이 질문은 real-time PCR 하며 생긴 고민인데, 이 외 다른실험에도 거품이 안생기게 loading하고 싶습니다.

 

제가 해본 방법과 결과로는

1. sealing 후 살살 탁탁 내려치기 → 표면에 생긴 큰 bubble은 안 없어짐
2. sealing 후 손가락으로 꿀밤때리듯 치기 → 큰 bubble들이 쪼개지긴 한데 없어지진 않을때도 있음
3. sealing 후 뒤집어서 내려치기→ bubble이 표면에 생기길래 뒤집어서 쳐봤는데.. sample이 넘쳐 버린것같아서 그뒤로 안쓰는 방법ㅠㅠ
4. centrifuge (500g, 3분) → 표면의 큰 bubble은 안 없어질때도 있음

입니다.
위 방법으로 어느정도 없어지기도 하지만, 그래도 더 완벽히 없애고 싶은데 잘 안되네요..

 

찾아보니

살살살 바닥에 치면된다, 꿀밤치듯 때려라, 헤어드라이어로 데워라(researchgate 글), 달군 바늘로 찔러라, centrifuge해라 가 있던데

이 밖에도 다른 방법이 있을까요?

 

아님 제 pipetting에 문제가 있는걸까요?

저는 tube 벽에대고 천천히 eject 한다고 하는데, 마지막에 2단계까지 눌러서 다 내보내려 하다보니 거품이 생기는것 같습니다. 하지만 또 어떨때는 매끈하게 흘러 쌓이기도 하구요. 어떤 차이인지 잘 모르겠습니다..

 

그래서 질문을 요약하면,

1. 96-well 에 생긴 bubble을 제거하는 방법이
바닥에 탁탁 내려치기, 손가락으로 꿀밤치듯 치기, centrifuge 이외에도 다른 팁이 있나요?
(헤어드라이어랑 달군 바늘 방법은 저희 랩에서 하기 어려울것같아서 제외하겠습니다..)

2. 선생님들께서는 loading할 때 거품이 생기지 않게하는 특별한 팁이 있나요?

 

#bubble
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이RBR  |  2019.11.17   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
PBS wash같이 정량이 떨어져도 되는경우에 피펫 빨아들일때 1step 말구 1.5step정도로 빨아들이시고 1step까지만 뱉으시면 이론상으로는 맞춰놓은양만 나오고 나머지 0.5step 어치는 남아있다고 볼 수 있긴 한데 너무 편법방법이라..
개구리지나가는사람  |  2019.11.18   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

저는 다음과 같이 진행합니다.

 

먼저 원스텝으로 media를 96 wells에 넣고, 그리고 media 에 팁을 넣지 않고 조금 위의 벽면에 올려 2스텝으로 잔량을 넣습니다. 천천히요~

 

그럼 버블이 생기지 않습니다.

개구리지나가는사람  |  2019.11.18   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

그리고, plate에 생긴 버블은 culture 중에 터져 없어집니다.

 

만약, ELISA 등과 같은 실험시 버블이 생긴다면, 깨끗한 주사바늘로 터칩니다.

 

최대한 작은 size로 진행합니다.

뒷다리hcp074  |  2019.11.18   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

real-time PCR인 경우라면 centrifuge를 좀 더 세게 하면 버블 사라집니다.

3000 rpm 5 min 정도를 시도해 보세요.

bubble제거팁  |  2019.11.20    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

안녕하세요..지나가다가 제목을 보고 들렸습니다.

제가 아는 팁을 하나 알려드리겠습니다.

위에 많은 정보들을 공유해주셨는데요..다들 좋은 방법들인데..제가 드리는 방법은 조금 다릅니다. .

실험실에 70%에탄올 분문기 다 가지고 계시죠...

분무기 헤드를 열어서 안쪽에 튜브를 제거합니다. 제거하고 헤드를 다시 장착합니다.  가능하면 에탄올은 병의 절반이하만 채워둡니다.

일정 시간이 지나만 분무기병 내부에 에탄올입자들이 채워진 기체가 모여있게 됩니다.

( 제가 용어표현이 부족해서.... 이해해주세요..)

그상태로 96well 에 생긴 버블들을 향해서 일정거리를 두고 분주해주면 에타올입자들이 나가면서 버블들을 깨트리고 에탄올입자들은 날아가 버립니다.

먼저 테스트해보세요..

도움이 되셨길 바랍니다.

 

수고하세요..

 

new app  |  2019.11.21    

바람을 불어줍니다. 그럼 큰 버블이 사라져요. 

답변  |  2019.11.21    

tip 거꾸로 하여 살짝 넣었다 빼주면 됩니다.

졸업생  |  2019.11.21    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

리버스파이펫팅하시면됩니다.

 

보통 한번눌러 흡입하고, 두번 눌러 완전히 용액을 모두 빼내실겁니다.

두번모두 눌러 흡입한 뒤, 한번만 눌러 용액을 빼내는 방법입니다.

그럴 경우 버블이 거의 들어가지 않습니다. 

마지막 완전히 빼낼때 버블이 들어가는 경우가 많은데, 그 행위를 하지 않기때문에 버블이 거의 들어가지 않습니다. 

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