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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot 실험시, 항체 반응 후 ponceau S staining
알대학원생94(대학원생)  |  11.15 15:42
첨부파일 파일첨부: ponceau s staining.PNG (69 KB)
이미지 첨부파일

western blot 실험 과정 중 결과에 대해서 여쭙고자 합니다.

PVDF membrane을 이용해서 transfer 하고 바로 항체 반응 진행했고, 그 후 chemiluminescence 과정까지 진행했습니다.
그 후에 membrane을 그대로 ponceau S 로 stain을 해봤습니다.  
결과는 첨부파일로 확인해주시면 됩니다.
(lane 1: marker, lane 2: 단백질1, lane 3: 단백질2, lane 4: 단백질3)

사진 결과를 보면 lane 3과 4에서 염색된 두꺼운 밴드가 보이는데, 이 밴드가 항체에 반응한 단백질 부분이라고 볼 수 있을까요? 그러면 다른 밴드가 안보이는 것은 항체 반응하지 않은 부분은 염색이 되지 않았다는 걸까요?

transfer 직후에 staining을 한것이 아니기때문에 다른 결과가 나올것이라 예상은 했지만,
어떻게 해석해야할지 모르겠어서 질문 드립니다.

 

감사합니다. 

#western blot
 
#ponceau S
 
#membrane
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.

chemiluminescence 측정한 사진과 비교해보면 알수 있습니다.

첨부 사진을 색상 조절해 보면 lane 2, 3, 4에서 염색된 단백질이 여러개 보입니다.

background 색으로 인해 잘 안보이는 것 뿐입니다.

대왕개구리SPEED  |  11.15 16:23  
웨스턴을 하면 미량의 항체가 타겟 단백질에 붙습니다.
그래서 멤브레인을 염색해도 항체가 붙었는지 알기는 어렵습니다.
웨스턴을 한 다음 폰슈로 염색하면 블라킹에 사용한 BSA나 스킴밀크 단백질이 멤브레인 전체에 그야말로 도배를 한 상태라서 멤브레인 전체가 빨갛게 염색됩니다.
그래서 젤이 빨갛게 보이는 것이며 단백질 밴드가 보이는 것은 원래 있는 만큼만 보이는 것이며 항체가 붙었는지는 말해주지 않습니다.
대왕개구리강시  |  11.15 21:13  

강시님 말씀처럼

Blocking한 membrane에는
membrane전체에 blocking protein이 달라붙어있으므로 

ponceau s 염색이 의미가 없습니다.
 

개구리무광  |  11.16 03:54  
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