실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
western blot 초보자 transfer 질문이요ㅠㅠ 제발 답변좀 부탁드려요ㅠㅠㅠ
레벨2 질문한 (대학원생)
안녕하세요. 웨스턴 블롯 처음해보는 대학원생입니다.
western blot 중 의문사항이 있어 이렇게 글을 남깁니다. 답변 부탁드립니다.
현재 transfer buffer 를 만들어서 여러가지 test 후 obtimization 과정에 있습니다. 100kDa 단백질을 타겟하고 있습니다. (wet 방법)
biorad power basic 을 사용중이며 100V (constant) 90min run 중에 있습니다.
marker 를 위의 조건으로 20% MeOH transfer buffer 를 transfer 시 100kDa 의 marker 만 gel에서 membrane (PVDF) 으로 이동을 못하였고, 10% MeOH transfer buffer 로 transfer 해보니 모든 marker 가 이동은 하지만 색이 연하여 transfer 가 너무 많이 되어 유실 되었다고 생각이 됩니다.
*질문*
다음 실험계획은 10% MeOH 을 100V 로 40min, 60min, 90min 으로 marker 의 이동양상을 확인하여 시간을 정하려고하는데
transfer 를 100V(C) 90min 을 맞춘 후에 40분에 한번, 60분에 한번 이렇게 중간중간 membrane 및 gel 을 확인하고 조립하여 다시보며 시간을 obtimization 해도 되나요?
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