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E. coli가 아닌 이상, transformation은 일반적으로 어렵습니다.
세균의 Restriction-methylation system이 외부에서 들어온 phage DNA나 plasmid를 조각조각 잘라내거든요. 일종의 방어시스템입니다.
이런 외부 DNA 거부현상은 아무래도 plasmid의 크기에 비례해서 심해집니다.
5kb 짜리가 transformation이 잘 됬다면 효율은 조금 낮아도 15kb 도 가능할것입니다.
두 plasmid의 차이를 보세요.
같은 origin인지, 같은 항생제 내성인지, 또는 항생제 내성을 잘못 사용하고 있지는 않은지 등등.
혹시 가지고 계신 15kb plasmid가 확실한지, 알고 있는 restriction map이 있다면 잘라서 밴드 패턴을 확인하는 것도 생각해 보시지요.
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레벨1
CamelJo
(대학생)
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19.11.16 00:37
좋은 정보 감사합니다! 참고하겠습니다.
lactobacillus의 electro-competent cell 만드는 방법이 상당히 많습니다.
어떤 방법으로 CP cell을 만들었나요?
아마도 CP cell 만드는 방법을 바꿔서 실험 해 보면 형질전환이 잘 될겁니다.
E.coli외에 Bacillus와 lactobacillus의 TF는 연구가 많이 되어 실제로 실험해보면
상당히 잘되는 균주입니다.
단 균주 별 TF 조건이 대장균 보다 다양하기 때문에 조건을 잘 최적화해야
합니다.