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hyaluronidase 저해활성 assay
레벨2 가즈아분자생물 (대학원생)
hyaluronidase 저해활성을 측정하고자 합니다
7,900 unit/mL hyaluronidase powder in 0.1 M sodium acetate buffer(ph 3.5) 50 uL
에 시료 50 uL 넣은 후 12.5 mM CaCl2*H2O in 0.1M aceatate b.f 100 uL를 추가 처리하여
37도에서 20분 반응
기질인 2.4 mg/mL hyaluronic acid in in 0.1M aceatate b.f 250 uL 첨가 후 37도에서 40분 반응
0.4 N NaOH in 0.1M aceatate b.f 100 uL, 0.4M potassium tetraborate in 0.1M aceatate b.f 100 uL를 넣어 반응 정지 시킨 후
끓는 물에 가열 3분 후 식힌 다음, DMAB(in HCl and Acetic acid)시약 3 mL 처리하여 37도 20분 반응 시켜 흡광도를 측정하였습니다.
넣는 양도 조절해 보곤 했는데 흡광도 수치가 0.037-0.041 O.D로 음성 대조군이나, 양성대조군이나 차이도 없고 활성이 안되는 것 같아요. 다른 논문 참고하여 unit 조절하고 기질양도 조절했는데 변화가 없어요ㅠㅠ
전문가분들 도와주세요ㅠㅠ
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